Caracterización funcional del gen NHX1 de eucalyptus globulus mediante expresión heteróloga en saccharomyces cerevisiae
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Fecha
2009
Autores
Profesor/a Guía
Facultad/escuela
Idioma
es
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Editor
Universidad Andrés Bello
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Licencia CC
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Resumen
La proteína NHX1 corresponde a una bomba de Na+/H+ localizada en la
membrana vacuolar, que participa en la respuesta a estrés por sal. La secuencia que
codifica para la proteína NHX1 de Eucalyptus globulus (EgNHX1) fue amplificada
mediante PCR desde un clon de una biblioteca de cONA construida previamente en el
laboratorio. Con el fin de determinar la participación de esta proteína en la respuesta a
estrés por sal, se expresó la proteína recombinante de Eucalyptus globulus en
Saccaromyces cerevisiae utilizando la cepa silvestre HIS5/YIL 116W. Ensayos de
crecimiento en presencia de sal muestran que la proteína EgNHX1 no incrementa en
forma significativa la tolerancia de la cepa silvestre de S. cerevisiae. Por otra parte, se
realizaron ensayos de complementación de mutantes NHX1 de S. cereviseae
YDR456W con la proteína EgNHX1, donde se observó una recuperación del fenotipo.
Estos resultados sugieren que la proteína NHX1 de Euca/yptus globu/us participa en la
respuesta a estrés por sal, puesto que la ausencia en la tolerancia de cepas mutantes
es revertida cuando se complementan con la proteína de E. globulus.
The NHX1 protein is a Na+;H+ antiporter located in the vacuolar membrana, which plays a role in salt stress response. The coding sequence far Eucalyptus globu/us protein NHX1 was amplified from a cDNA library constructed previously in the laboratory. To establish the role of this protein in salt stress response, the recombinant Euca/yptus globulus protein was expressed on Saccaromyces cerevisiae wild type strain BY4743. Growth assays in presence of salt show that the EgNHX1 protein does not significantly increase salt tolerance in S. cerevisiae. Alternatively, complementation assays of mutants NHX1 from S.cerevesiae strain YDR456W with EgNHX1 show a recuperation of the wild-type phenotype. These results suggest that the NHX1 protein of Eucalyptus glubu/us plays an important role in salt tolerance.
The NHX1 protein is a Na+;H+ antiporter located in the vacuolar membrana, which plays a role in salt stress response. The coding sequence far Eucalyptus globu/us protein NHX1 was amplified from a cDNA library constructed previously in the laboratory. To establish the role of this protein in salt stress response, the recombinant Euca/yptus globulus protein was expressed on Saccaromyces cerevisiae wild type strain BY4743. Growth assays in presence of salt show that the EgNHX1 protein does not significantly increase salt tolerance in S. cerevisiae. Alternatively, complementation assays of mutants NHX1 from S.cerevesiae strain YDR456W with EgNHX1 show a recuperation of the wild-type phenotype. These results suggest that the NHX1 protein of Eucalyptus glubu/us plays an important role in salt tolerance.
Notas
Tesis (Ingeniería en Biotecnología)
Palabras clave
Eucaliptus Globulus, Genética Forestal, Proteínas