Virus de la anemia infecciosa del salmón, una mirada hacia la replicación viral y una solución al diagnóstico
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Fecha
2008
Autores
Profesor/a Guía
Facultad/escuela
Idioma
es
Título de la revista
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Editor
Universidad Andrés Bello
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Licencia CC
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Resumen
El virus de la anemia infecciosa del salmón (ISAV), es un agente etiológico que afecta
principalmente a los cultivos de salmón Atlántico, representando el primer aislado de un
Orthomyxovirus desde teleostos, siendo clasificado como un nuevo género dentro de la
familia. La enfermedad se caracteriza por una severa anemia y altas mortalidades, siendo
así un patógeno de alto riesgo.
El ciclo replicativo de los Orthomyxovirus incluye una entrada a la célula mediada por
receptor, endocitosis, liberación de la ribonucleoproteína y translocación al núcleo donde
ocurre tanto la transcripción del mRNA como la replicación del genoma viral. Algunas de las
proteínas virales, permanecen en el citoplasma o asociadas a la membrana plasmática, sin
embargo, la NP y las polimerasas, migran de regreso al núcleo, donde se asocian con el
vRNA nuevamente sintetizado formando una nueva RNP, la cual migra de regreso al
citoplasma y la membrana celular.
En esta tesis se realizaron estudios del ciclo replicativo del ISAV mediante
inmunofluorescencia indirecta, ca-localizaciones por microscopia confocal, hibridaciones in
situ y microscopía electrónica que sugieren fuertemente la existencia de una fase nucleolar
temprana y una tardía en el aparato de Golgi que involucran tanto a la NP como al vRNA.
Estos resultados nos inducen a proponer una ruta alternativa en el ciclo replicativo del ISA V
o etapas no descritas para la familia Orthomyxoviridae. Una etapa muy temprana en el ciclo
replicativo que involucra al nucléolo, estructura crucial en la regulación del ciclo celular,
puede explicar el éxito de la familia viral. Por otro lado, una localización en el aparato de
Golgi de partículas virales pre-ensambladas y la utilización de la ruta secretora para la
liberación viral, con una clara compartimentalización de los componentes virales puede
favorecer un ensamblaje adecuado de los 8 segmentos de RNA, interrogante que ha
permanecido abierta y ha sido ampliamente estudiada.
Finalmente y utilizando algunos de los anticuerpos monoclonales desarrollados en esta tesis,
con los cuales se estudió del ciclo replicativo, se diseñó y desarrolló un test para el
diagnóstico del ISAV basado en un ensayo de ELISA, el cual es altamente específico,
estable y eficiente en el reconociente viral.
The infectiaus salman anemia virus {ISAV) is an impartant pathagen in the salman industry. This virus canstitutes the first repart af an Orthamyxavirus isalated fram teleasts and has been classified in a new genus, lsavirus. The disease is characterized by a severe anemia and high martalities. Far this reasan it has been catalagued as a high risk pathagen. The replicative cycle af the Orthamyxaviruses starts with the endacytasis of the viral particle, fallowed by the release af the ribanucleaprotein (RNP) to the cytaplasm. By means af nuclear localization signals (NLS), the RNP is translacated inta the nucleus where transcriptian and replication takes place. Sorne viral proteins remain inta the cytaplasm ar assaciated ta plasmatic membrane. However, the NP and the polymerase, return to the nucleus, where these proteins and the viral RNA farm a new RNP which migrates ta the cytaplasm and ta the plasmatic membrane. In this wark, studies were made an the replicative cycle af ISAV using immunafluarescence, co-localizatian by canfocal microscopy, in situ hybridizatians and electran microscopy. These studies revealed a step in early infectian accurring in the nucleali and another step in the late infectian in the Galgi apparatus. In bath cases the NP as well as the viral RNA are invalved. These results strangly suggest an alternative pathway in the replicative cycle af ISA V which was nat been described befare far Orthamyxaviridae family. In additian, using sorne of the monaclonal antibodies develaped in this thesis, a diagnastic ELISA test was designed and develaped. The test is highly specific and efficient for the detectian af the viruses.
The infectiaus salman anemia virus {ISAV) is an impartant pathagen in the salman industry. This virus canstitutes the first repart af an Orthamyxavirus isalated fram teleasts and has been classified in a new genus, lsavirus. The disease is characterized by a severe anemia and high martalities. Far this reasan it has been catalagued as a high risk pathagen. The replicative cycle af the Orthamyxaviruses starts with the endacytasis of the viral particle, fallowed by the release af the ribanucleaprotein (RNP) to the cytaplasm. By means af nuclear localization signals (NLS), the RNP is translacated inta the nucleus where transcriptian and replication takes place. Sorne viral proteins remain inta the cytaplasm ar assaciated ta plasmatic membrane. However, the NP and the polymerase, return to the nucleus, where these proteins and the viral RNA farm a new RNP which migrates ta the cytaplasm and ta the plasmatic membrane. In this wark, studies were made an the replicative cycle af ISAV using immunafluarescence, co-localizatian by canfocal microscopy, in situ hybridizatians and electran microscopy. These studies revealed a step in early infectian accurring in the nucleali and another step in the late infectian in the Galgi apparatus. In bath cases the NP as well as the viral RNA are invalved. These results strangly suggest an alternative pathway in the replicative cycle af ISA V which was nat been described befare far Orthamyxaviridae family. In additian, using sorne of the monaclonal antibodies develaped in this thesis, a diagnastic ELISA test was designed and develaped. The test is highly specific and efficient for the detectian af the viruses.
Notas
Tesis (Doctor en Biotecnología)
Palabras clave
Salmón, Enfermedades