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Desarrollo y evaluación del efecto de microbacterinas de piscirickettsia salmonis formuladas con filifolinona contra el síndrome rickttsial salmonídeo

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dc.contributor.advisor Modak, Brenda
dc.contributor.advisor Valenzuela, Beatriz
dc.contributor.author Parra Mardónez, Mick Philippe
dc.contributor.editor Facultad de Ciencias Biológicas
dc.contributor.editor Escuela de Ingeniería en Biotecnología
dc.date.accessioned 2017-08-24T13:05:16Z
dc.date.available 2017-08-24T13:05:16Z
dc.date.issued 2017
dc.identifier.uri http://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/4001
dc.description Tesis (Magíster en Biotecnología) es_CL
dc.description.abstract La acuicultura genera ingresos por más de US$3.500.000.000 al año debido a la exportación de salmón y trucha (Banco central, 2016; Dirección de Aduanas, 2016), sin embargo, estas especies son afectadas por Piscirickettsia salmonis, (Olivares y Marshall, 2010; Tobar et al., 2011), patógeno que genera pérdidas sobre los US$ 700 millones al año (Maisey, 2016). A pesar del uso de antimicrobianos y vacunas para su control, estos tratamiento no son efectivos contra esta patología (Rozas y Enríquez, 2014; Tacchi et al., 2011), siendo necesario evaluar nuevas estrategias para el control de P. salmonis. En esta búsqueda es que se ha estudiado que bacterias tiene la capacidad de reducir su tamaño (microbacterias), forman biofilm, expresando diferencialmente proteínas en la membrana externa (Caccavo et al., 1996; Duda et al., 2012; Hahn et al., 2003), la disminución del tamaño y la generación de biofilm ya ha sido reportada en P. salmonis (Marshall et al., 2012; Rojas et al., 2008) siendo quizás esta la forma en cual P. salmonis ingresan al hospedero generando la infección. Uno de los problemas asociado al proceso de vacunación es la poca disponibilidad de coadyuvates, es por eso que estudios realizados con filifolinona, un derivado terpénico aislado de la resina de plantas del género Heliotropium, muestran que este compuesto tienen efectos inmunoestimulantes y antibacterianos (Modak, et al., 2012; Valenzuela et al., 2015), siendo posible su utilización como coadyuvantes. En esta tesis se evaluó el efecto protector de microbacterias de P. salmonis (sP.s.), conjugada con filifolinona, el que se ha demostrado posee efecto inmunomodulador y antibacteriano. Para lograr lo mencionado, se obtuvieron microbacterias de P. salmonis (sP. s) utilizando la línea celular CHSE-214, incubándolas por 2 meses a 16°C. La confirmación de la obtención de sP.s. se realizó mediante PCR del gen 16S y a través de citometría de flujo. Posteriormente se elaboró microbacterinas de P. salmonis y se inmunizaron Salmo salar, evaluando la generación de anticuerpos mediante ELISA, así como la expresión de mRNA de citoquinas a través de RT-PCR. Los resultados demostraron que microbacterinas de P.salmonis conjugado con filifolinona, aumentan los niveles de transcrito de IFN-γ e IL-12, citoquinas claves para una respuesta celular tipo th1, importante para la defensa contra patógenos intracelulares como P. salmonis es_CL
dc.description.abstract The aquaculture industry in Chile reports annual incomes exceeding US$3,500,000,000, thanks to the exportation of salmon and trout. However, more than US$ 700 million are lost annually due to Piscirickettsia salmonis, a pathogen that affects these fish species. Although antimicrobials and vaccines have been used as strategies to control this bacterium, these treatments have not demonstrated total effectiveness. Therefore, it is necessary to evaluate new measures to control the pathogen. Researches have reported that this bacterium has the ability to reduce its size (microbacterium) and to produce biofilm. Since these microbacteria are differentially expressing proteins on the surface of the outer membrane as to trigger these changes, it is important to consider such capacities when creating new vaccine antigens. Furthermore, size reduction and biofilm might be the way that P. salmonis uses to infect the host. Another problem associated to the low effectiveness of vaccines is the lack of available complementary treatments to help solving the illness. Hence, there is a need to use a new coadyuvant. Several studies carried out using filifolinone, a terpenic derivative isolated from the resin of plants of the genus Heliotropium, show that this compound possesses immunostimulant and antibacterial effects. These characteristics could possibly be used as coadyuvants. In this research, it was possible to observe that P. salmonis diminishes its size (microbacteria) to less than 0,2 μm under conditions of nutritional stress. This was proven by means of PCR analysis of the rRNA 16S gene and by flow cytometry using a cell culture supernatant infected with P. salmonis filtered with a pore size 0,2 μm. In addition, and also by using flow cytometry, it was possible to notice the formation of biofilm under stress conditions. With these microbacteria of P. salmonis, microbacterines where created and mixed with the terpenic derivative of filifolinone. This formulation was administered intramuscularly in Salmo salar, and its effect on the stimulation of the immune system was evaluated. The results showed that the fish that were injected with microbacterines mixed with filifolinone raised the transcription levels of IFN-y e IL-12, important cytokines for a th1-type cellular response, key to fight against intracellular pathogens like P. salmonis.
dc.language.iso es es_CL
dc.publisher Universidad Andrés Bello es_CL
dc.subject Salmón es_CL
dc.subject Enfermedades es_CL
dc.subject Rickettsiosis es_CL
dc.subject Microbacterias es_CL
dc.title Desarrollo y evaluación del efecto de microbacterinas de piscirickettsia salmonis formuladas con filifolinona contra el síndrome rickttsial salmonídeo es_CL
dc.type Thesis es_CL


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