Participación de G-CSF en la migración de neutrófilos de pez cebra en respuesta a un daño

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Fecha
2013
Idioma
es
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Editor
Universidad Andrés Bello
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Resumen
Los neutrófilos son un tipo celular esencial para el desarrollo de una respuesta inflamatoria. La correcta regulación de la entrada de neutrófilos al sistema circulatorio es de gran importancia. Una neutropenia, o disminución permanente de los niveles sanguíneos de neutrófilos esta asociada a una mayor susceptibilidad a infecciones. Un aumento en los niveles sanguíneos puede llevar a infiltración de estos en los tejidos sanos, produciendo enfermedades inflamatorias. Se ha visto en mamíferos que el Factor Estimulador de Granulocitos, G-CSF, participa en la salida de los neutrófilos a la sangre, desde el sitio donde son retenidos, la médula ósea. G-CSF actúa disminuyendo los niveles de señales pro-retención, como CXCL12 con su receptor CXCR4, y aumentando la señalización pro-migración como son las citoquinas CXCL1, CXCL2 y CXCL8 con sus receptores CXCR1 y CXCR2. En pez cebra existen 2 parálogos para este gen, uno ubicado en el cromosoma 12 (gcsf-chr12), y otro ubicado en el cromosoma 19 (gcsf-chr19). Liongue et al. 2009 estudió gcsf-chr12 junto con su receptor y concluyeron que no participaba en la migración de neutrófilos en respuesta a un daño en la aleta ventral, pero que sí se observó un aumento en su expresión 8 horas después de ser desafiado con LPS. En este trabajo, estudiamos la participación de gcsf-chr 19 en la migración de neutrófilos en respuesta a un daño. Realizamos tres tipos distintos de daño: daño cercano, distante y severo. Y solo en el daño severo observamos la llegada de neutrófilos al daño por la circulación. Utilizamos este modelo de daño para analizar la expresión de gcsf-chr 19 y cxcl8, observamos un aumento de ambos 0.5 horas post daño (hpd) y un nivel máximo de expresión 1 hpd. Los niveles de gcsf-chr 19 disminuyeron a las 2 hpd y a las 3 hpd ya no se encontraron diferencias con los niveles basales. Los niveles de cxcl8 disminuyeron a las 2 hpd, pero a diferencia de g-csfchr 19 presenta un ligero aumento a las 3 hpd. Se diseñó un morfolino contra gcsf-chr 19 para analizar el efecto de la falta de función de este gen en la migración de neutrófilos. Se observó que en los controles sin inyectar, el porcentaje de neutrófilos en el sitio del daño aumentó considerablemente al comparar 1 y 3 hpd. En cambio, en los peces morfantes, el porcentaje de neutrófilos 3 hpd es similar a 1 hpd. Al inhibir la formación de peróxido de hidrógeno (señal pro-migratoria antes de 1 hpd) con el compuesto DPI se observa una disminución en el porcentaje de neutrófilos en el sitio del daño en embriones morfantes y controles a 1 hpd. En embriones controles este porcentaje aumenta a las 3 hpd, en cambio en morfantes se mantiene.
Notas
Tesis (Magister en Biotecnología)
Palabras clave
Pez Cebra, Sistema Inmune
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