Caracterización del sistema de incorporación de hierro Fet3/Ftr1 en el hongo fitopatógeno Botrytis cinerea y evaluación de su participación en el proceso de infección
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Fecha
2019
Autores
Profesor/a Guía
Facultad/escuela
Idioma
es
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Editor
Universidad Andrés Bello
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Licencia CC
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Resumen
Botrytis cinerea es un hongo fitopatógeno que infecta un número muy significativo de especies vegetales de interés comercial, afectando principalmente el cultivo de frutilla, uva y tomate, entre otros. Este hongo produce necrosis en los tejidos vegetales que infecta, destruyendo la célula hospedera para obtener los nutrientes, generando cuantiosas pérdidas económicas a nivel mundial. Debido a esto, el estudio de las estrategias de infección de B. cinerea tiene una gran relevancia. Los mecanismos de infección son complejos y variados, y están regulados por distintos factores moleculares y ambientales. Entre las variables ambientales, los micronutrientes juegan un papel fundamental, pero pese a ello, en el caso de B. cinerea, no existe mayor información respecto de cómo distintos micronutrientes pueden incidir en el desarrollo e infección causada por el hongo. En particular, se ha descrito que el hierro es un micronutriente esencial para el desarrollo de la mayoría de los organismos, jugando un papel fundamental en las infecciones de muchos patógenos. Además, está involucrado en las respuestas de plantas frente a estos organismos. En B. cinerea, los mecanismos de captación de hierro no están estudiados, pero la presencia en el genoma de secuencias que codifican para proteínas hipotéticas asociadas a captación de hierro hace pensar que este micronutriente, también estaría jugando un rol fundamental en este organismo. Las proteínas de interés corresponden a Fet3 y Ftr1, caracterizadas inicialmente en Saccharomyces cerevisiae como parte del sistema de captación de hierro de alta afinidad, que también ha sido descrito en hongos fitopatógenos. Fet3 es un ferroxidasa de membrana que permite la oxidación del metal, el que ingresa al intracelular por medio de Ftr1, una permeasa de hierro. Mediante recombinación homóloga en el genoma de B. cinerea, se delecionaron los genes ortólogos a fet3 y ftr1, los que fueron denominaods bcfet3 y bcftr1. De esta forma, se estudió cómo una variable ambiental, hierro, afecta el desarrollo de la infección causada por el hongo en Phaseolus vulgaris y Arabidopsis thaliana. Los resultados muestran que la cepa mutante Δbcfet3 posee un fenotipo de crecimiento/desarrollo atípico en condiciones de ciclos de luz/oscuridad. En comparación con la cepa silvestre, la mutante Δbcfet3 presenta un retraso en el desarrollo de conidias y formación de estructuras de sobrevivencia denominadas esclerocios, las que se generan normalmente condiciones desfavorables. La formación de estas estructuras se revierte de manera dependiente de la concentración de hierro. Adicionalmente, ensayos de virulencia indican que la cepa mutante Δbcfet3 genera lesiones significativamente más grandes, en comparación, con la lesión causada por la cepa B05.10 (silvestre). Contrario a lo que ocurre con la cepa Δbcftr1 donde no se observaron diferencias en el área de lesión. Ensayos cualitativos realizados in planta nos permiten sugerir fuertemente, que la lesión causada por la mutante Δbcfet3 provoca un estallido oxidativo más extenso que el causado por la cepa B05.10 o la mutante Δbcftr1.
Notas
Tesis (Magíster en Biotecnología)
Palabras clave
Hongos Fitopatógenos, Investigaciones