Estudio del papel del receptor LGR5 sobre la proliferación de células progenitoras neurales adultas
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Fecha
2021
Autores
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Idioma
es
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Editor
Universidad Andrés Bello
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Licencia CC
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Resumen
La neurogénesis hipocampal adulta es regulada por la vía de señalización Wnt,
la que también participa de la regulación de células madre de distintos tejidos del
cuerpo como el intestino, la piel y el riñón. Interesantemente, en células madre
adultas de los tejidos epiteliales se ha identificado que la vía de señalización Wnt
es potenciada por la señalización mediada por LGR5, una proteína receptora de
membrana rica en leucina que tiene una alta afinidad por ligandos R-spondin
(RSPO). Además, LGR5 tiene la capacidad de interactuar con las E3 ubiquitina
ligasas ZNRF3 y RNF43 inhibiendo su capacidad de degradar los receptores de
la vía Wnt y en consecuencia estimulando la señalización Wnt. Este mecanismo
regula la proliferación y diferenciación de las células madre, pero dicha regulación
no se ha sido determinada en células madre neurales (NSC) del hipocampo
adulto. Resultados preliminares del laboratorio demuestran que LGR5 se expresa
en progenitores neurales adultos (aNPCs) aislados desde el hipocampo, y que
ligandos RSPO pueden regular la proliferación de estas células, pero se
desconoce si este efecto proliferativo está mediado por LGR5. En base a estos
antecedentes propusimos como hipótesis que “LGR5 media el efecto proliferativo
de ligandos RSPO en aNPCs”. Para abordar esta hipótesis propusimos como
objetivo “analizar la respuesta proliferativa de aNPCs a RSPOs al silenciar la
expresión de LGR5”. Para abordar este objetivo se realizó el silenciamiento de
LGR5 mediante la infección con un retrovirus que expresa un shRNA contra este
receptor (shLGR5). Se evaluó la expresión de LGR5 en las células aNPCs
infectadas mediante inmunofluorescencia, Western-blot y RT-qPCR.
Posteriormente, se realizó un ensayo de proliferación en células infectadas con
el retrovirus expresando el shLGR5 o un shRNA control mediante la
incorporación y detección del análogo de nucleótido BrdU. Logramos determinar
que la expresión de shLGR5 induce una disminución de LGR5 tanto a nivel de
mRNA como de proteína. Los resultados de proliferación no fueron concluyentes
en relación al efecto del silenciamiento de LGR5, por lo que será necesario
aumentar el número de experimentos para poder concluir si LGR5 no media el
efecto proliferativo de RSPO.
Notas
Tesis (Licenciado en Biología)
Palabras clave
Vía de Señalización Wnt, Células Madre Neurales