Secuenciación y expresión en Pichia pastoris GS115 del gen que codifica para una alfa glucoronidasa de Penicillium purpurogenum y caracterización de la enzima heteróloga
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Fecha
2011
Autores
Profesor/a Guía
Facultad/escuela
Idioma
es
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Editor
Universidad Andrés Bello
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Resumen
La lignocelulosa es el principal componente de la pared celular de las plantas. A partir de la degradación de ésta se puede generar energía renovable para producir biocombustibles de segunda generación. Esta lignocelulosa está compuesta por lignina, pectinas, celulosa y hemicelulosas, donde el xilano es la hemicelulosa más abundante. Para la hidrólisis completa del xilano (estructura compleja) se requiere de numerosas enzimas que actúan sobre su cadena principal y otras enzimas desramificantes. Dentro de las enzimas desramificantes se encuentran las alfa glucuronidasas que son las enzimas hemicelulolíticas menos estudiadas. Las alfa glucuronidasas liberan ácido metil glucurónico a partir de glucuronoxilano. Penicillium purpurogenum es un hongo secretor de múltiples enzimas hemicelulolíticas y es el modelo de estudio de nuestro laboratorio. En el género Penicillium no han sido descritos estudios bioquímicos de alfa glucuronidasas, y esta Tesis tiene como objetivo identificar y caracterizar la enzima de este hongo.
En esta Tesis se secuenció el gen que codifica para una alfa glucuronidasa de P. purpurogenum y el cDNA preparado a partir de mRNA extraído de cultivos líquidos de este hongo crecido en xilano de madera de abedul. Este gen tiene un tamaño de 2523 pb y carece de intrones. Este gen se expresó heterologamente en Pichia pastoris GS115 con el objetivo de realizar estudios bioquímicos de la enzima que tiene un tamaño de aproximadamente 100 kDa, un pH óptimo de 4,5-5,O y una temperatura óptima de 37 °C.
Esta enzima actúa sobre xilooligosacáridos cortos y no así sobre xilano no hidrolizado. De acuerdo a estas características la alfa glucuronidasa de P. purpurogenum pertenece a la familia GH67.
Notas
Tesis (Bioquímico)
Palabras clave
Pichia pastoris GS115, Penicillium Purpurogenum, Levaduras