Caracterización del operón de fimbria stg de salmonella enterica serovar typhi: estudios de expresión y participación en la adherencia a células humanas
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Fecha
2012
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Idioma
es
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Editor
Universidad Andrés Bello
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Licencia CC
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Resumen
Salmonella enterica serovar Typhi es el agente causal de la fiebre tifoidea exclusivamente en el ser humano y tiene doce operones de fimbria de la familia chaperona-usher en su genoma, entre ellos stgABCD que no existe en S. Typhimurium, serovar que produce fiebre tifoidea en el ratón. En este trabajo se caracterizó el operón stg y se determinó su participación en la patogenicidad de S. Typhi. La cepa clínica S. Typhi STH23 70 y las cepas secuenciadas Ty2 y CT18 tienen un codón de término prematuro en el marco de lectura stgC, que codifica para la proteína usher, de manera que está descrito como un pseudogen. Cuando el operón stgABCD se delecionó desde S. Typhi STH2370, se observó una disminución de la adherencia e invasión a células fagocíticas humanas. Por el contrario, cuando el operón stg fue clonado en el vector de mediano número de
copias pSU19 y transformado en S. Typhimurium 14028s aumentó la adherencia e invasión a células mononucleares de sangre periférica. En ensayos de migración transepitelial realizados en células HT -29 polarizadas, la expresión heteróloga del operón stgABCD en S. Typhimurium 14028s modificó su comportamiento habitual de migración, observándose un fenotipo similar al de la cepa silvestre S. Typhi STH2370, que altera más notoriamente la permeabilidad celular. Para estudiar la expresión del operón stg, se hizo una fusión traduccional con el epítopo 3XFlag en
el gen stgD, que codifica para la adhesina de la fimbria. El operón marcado de esta forma se clonó sin su promotor endógeno en el vector pGem-TEasy. Luego, a través de un ensayo de Western blot se observó que la proteína StgD se sintetizó cuando el operón está sobreexpresado tanto en la cepa mutante como en la cepa heteróloga. Por inmunomicroscopía electrónica en estas mismas cepas, se comprobó la presencia de esta proteína en la superficie bacteriana. Esto sugiere que el operón stg de S Typhi da origen a una fimbria capaz de ensamblarse en la superficie bacteriana, usando probablemente su propio usher descrito como pseudogen o un
usher alternativo que pueda funcionar en esta vía. Los resultados también sugieren que esta fimbria contribuye en la adherencia a células fagocíticas humanas, ayudando en la interacción patógeno-hospedero durante el cuadro de fiebre tifoidea.
Notas
Tesis (Doctor en Biociencias Moleculares)
Palabras clave
Salmonella Typhi, Células