Varela-Nallar, LorenaOropesa Rivera, Daniel AntonioFacultad de Ciencias de la Vida2024-10-152024-10-152021https://repositorio.unab.cl/handle/ria/61309Tesis (Licenciado en Biología)La neurogénesis hipocampal adulta es regulada por la vía de señalización Wnt, la que también participa de la regulación de células madre de distintos tejidos del cuerpo como el intestino, la piel y el riñón. Interesantemente, en células madre adultas de los tejidos epiteliales se ha identificado que la vía de señalización Wnt es potenciada por la señalización mediada por LGR5, una proteína receptora de membrana rica en leucina que tiene una alta afinidad por ligandos R-spondin (RSPO). Además, LGR5 tiene la capacidad de interactuar con las E3 ubiquitina ligasas ZNRF3 y RNF43 inhibiendo su capacidad de degradar los receptores de la vía Wnt y en consecuencia estimulando la señalización Wnt. Este mecanismo regula la proliferación y diferenciación de las células madre, pero dicha regulación no se ha sido determinada en células madre neurales (NSC) del hipocampo adulto. Resultados preliminares del laboratorio demuestran que LGR5 se expresa en progenitores neurales adultos (aNPCs) aislados desde el hipocampo, y que ligandos RSPO pueden regular la proliferación de estas células, pero se desconoce si este efecto proliferativo está mediado por LGR5. En base a estos antecedentes propusimos como hipótesis que “LGR5 media el efecto proliferativo de ligandos RSPO en aNPCs”. Para abordar esta hipótesis propusimos como objetivo “analizar la respuesta proliferativa de aNPCs a RSPOs al silenciar la expresión de LGR5”. Para abordar este objetivo se realizó el silenciamiento de LGR5 mediante la infección con un retrovirus que expresa un shRNA contra este receptor (shLGR5). Se evaluó la expresión de LGR5 en las células aNPCs infectadas mediante inmunofluorescencia, Western-blot y RT-qPCR. Posteriormente, se realizó un ensayo de proliferación en células infectadas con el retrovirus expresando el shLGR5 o un shRNA control mediante la incorporación y detección del análogo de nucleótido BrdU. Logramos determinar que la expresión de shLGR5 induce una disminución de LGR5 tanto a nivel de mRNA como de proteína. Los resultados de proliferación no fueron concluyentes en relación al efecto del silenciamiento de LGR5, por lo que será necesario aumentar el número de experimentos para poder concluir si LGR5 no media el efecto proliferativo de RSPO.esVía de Señalización WntCélulas Madre NeuralesTesis