Paredes-Sabja, DanielBrito Silva, Christian Andrés2022-10-132022-10-132019https://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/24261Tesis (Doctor en Biociencias Moleculares)Este trabajo fue financiado por los siguientes fondos: Fondecyt Regular Folio: 1151025 y 11105069 Beca de Doctorado Nacional Conicyt Folio: 21130830Clostridium difficile es una bacteria Gram-positiva, patógena intestinal, causante de episodios recurrentes de diarrea, disrupción de la barrera epitelial y formación de pseudo membrana. El sistema del complemento actúa como barrera temprana del sistema inmune que modula tanto inmunidad innata como adaptativa. La relación de C. difficile con el complemento no ha sido estudiada, pero se ha reportado quela expresión de C3en el intestino se incrementa hasta 6 veces en respuesta a las toxinas de C. difficile sugiriendo un potencial rol en la patogénesis. Esta tesis se focalizó en estudiar la espora de C. difficiley el sistema del complemento ya que ha sido previamente reportado que BclA una proteína ortóloga encontrada en esporas de Bacillus anthracis captura moléculas del complemento para promover internalización en células del hospedero. En este estudio se encontró queC3y C1qse unena las esporas de C. difficile y además las esporas de la cepa R20291 activan C3 lo que promueve su unión a las esporas in vitro. La proteína tipo colágeno BclA3 participa en la unión de C3 y C1q a las esporas de la cepa hiper virulenta R20291 in vitro. En la cepa 630∆ermBclA1, BclA2 y BclA3 participan de la unión de C1q a las esporas in vitro. Ensayos de infección realizados con esporas incubadas en sueros de pletados de C1q y C3 mostraron que la internalización de esporas en células epiteliales intestinales Caco-2 disminuye respecto a la condición con suero humano normal (SHN). Al reconstituir estas moléculas la internalización de las esporas se restableció a niveles similares a la condición con SHN sugiriendo un posible mecanismo de internalización de esporas de C. difficile mediado por las moléculas delcomplementoC1q y C3que deberá ser explorado más en profundidad en futuros estudios.Clostridium difficileis a Gram-positive bacterium, intestinal pathogen, causing of recurrent episodes of diarrhea, the disruption of the epithelial barrier andtheformation of pseudomembrane. The complement system acts as an early barrierofthe immune system that modulates both innate and adaptive immunity. The relationship of C. difficileto complement has not been studied, but it has been reported that C3 expression in the gut increases up to 6 times in response to C. difficiletoxins suggesting a potential role in pathogenesis. This thesisfocused on studying the C. difficilespore and complement system as it has beenpreviouslyreported thatBclA an orthologue protein founded inBacillus anthracisspores capture complement molecules to promote internalization in host cells. In this study it was found that C3 and C1q bind to C. difficilespores in additionthe spores of R20291 strain activated C3 that could promote the binding of C3 to the spores in vitro.The collagen-like protein BclA3 is involved in the binding of C3 and C1q in the hypervirulent strainR20291in vitro.In the 630∆ermstrain BclA1, BclA2 and BclA3 are involved in the binding of C1q to the sporesbut remains unclear in the case of C3. Infection assays performed with sporesincubatedin C3 and C1qdepleted sera showed that the internalization of spores in theintestinal epithelial cellsCaco-2drops with respect to the condition with normal human serum (SHN). By reconstituting these molecules,the internalization of the spores was restored to similar observed inthe condition with SHN. These data suggest a mechanism ofinternalization ofC. difficilesporesmediated by the complement proteins C3 y C1qthat should be explored further in future studies.esClostridium DifficileEsporasAnálisisTesis