Reyes, ArielGuajardo Cáceres, Laura InésFacultad de Ciencias Biológicas2020-03-302020-03-302012http://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/12524Tesis (Doctor en Biociencias Moleculares)a variante de histona macroH2A regula la expresión génica principalmente por represión de la transcripción, asociándose a eventos de heterocromatinización, como la inactivación del cromosoma X. Estudios in vitro indican que macroH2A podría regular el desarrollo embrionario, permitiendo la expresión de genes Hox y de las familias génicas Dix, Pax y Six que regulan el desarrollo temprano del sistema nervioso, ojo y retina. Además, sólo el transcrito de la isoforma macroH2A2 se expresa durante el desarrollo embrionario del pez cebra. En este contexto el objetivo principal de este trabajo fue la caracterización de la función de macroH2A2 durante la formación de la retina del pez cebra. La determinación del patrón de expresión del transcrito macroH2A de pez cebra por hibridación in situ, muestra que sólo la isoforma macroH2A2 se expresa en el cerebro y retina durante el desarrollo embrionario, principalmente en la región anterior del embrión, en el primordio, vesícula y copa ópticas, el neuroepitelio retinal y en las capas de células ganglionares y plexiforme interna de la retina diferenciada. Esta expresión concuerda con las etapas de proliferación, especificación y diferenciación de distintos territorios en el sistema nervioso central, especialmente con el desarrollo de la retina. Con estos antecedentes se decidió caracterizar el efecto de la falta de función (knockdown) de macroH2A2 durante el desarrollo de la retina usando la inyección de morfolinos específicos. El knockdown específico de macroH2A2 afectó principalmente la región anterior del embrión, coincidente con los territorios de expresión del transcrito de macroH2A2. Se obtuvieron dos fenotipos reproducibles y dependientes de la concentración de morfolino inyectado: embriones acéfalos (fenotipo severo) y con microcefalia, microftalmia y ausencia de las capas retinales (fenotipo leve). Este último consecuencia de una retinogenesis defectuosa. La caracterización del fenotipo leve, durante el desarrollo de la retina muestra que la etapa proliferativa de los progenitores retinales, que darán origen a todos los tipos celulares de la retina, se llevó a cabo normalmente. Sin embargo, la etapa de determinación ocurrió en forma defectuosa. Se observaron defectos en la inhibición de la proliferación, necesaria para la salida del ciclo celular de los progenitores retinales y posterior diferenciación. En la retina de las larvas morfantes se mantuvieron elevados los niveles de ciclinaD1, PCNA y p-Histona H3, con un evidente alargamiento de la fase S del ciclo celular. Por otro lado, también se detectaron niveles aumentados de [3- catenina en las retinas morfantes de macroH2A2, siendo posiblemente ésta una de las causas de la proliferación aumentada observada en tejido de la retina. Estos antecedentes sugieren fuertemente que macroH2A2 contribuiría a la regulación de la inhibición de la vía de señalización Wnt/[3-catenina en la retina en desarrollo y que además sería necesaria para la progresión y salida del ciclo celular de los progenitores retinales. Este trabajo de tesis es el primer estudio in vivo que describe la función de la variante de histona macroH2A2 en un proceso específico del desarrollo embrionario, la retinogenesis. Estos datos contribuyen a aumentar nuestro conocimiento, aún escaso, sobre la participación de mecanismos epigenético en el desarrollo embrionario.esPez CebraInvestigacionesTesis