Saavedra, ClaudiaKrüger Carrasco, Gabriel IgnacioFacultad de Ciencias de la Vida2021-07-192021-07-192020http://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/19427Tesis (Magíster en Biotecnología y Ciencias de la Vida)Esta tesis se realizó en el laboratorio de Microbiologia Molecular de la Facultad de Ciencias de la Vida de la Universidad Andrés Bello y fue financiada por el proyecto FONDECYT N° 1160315.El sistema de dos componentes ArcAB ha sido estudiado por nuestro laboratorio y se ha determinado su participación en varios procesos de importancia en Salmonella Typhimurium, principalmente al combatir y evadir la acción de fagocitos del sistema inmune innato durante su ciclo infectivo, sin embargo, aún no se ha dilucidado su participación contra el sistema inmune adaptativo. El sistema inmune adaptativo tiene como principal vinculante con el sistema innato a las células dendríticas. Estas células son presentadoras de antígeno profesionales, por lo cual, procesan al patógeno para posteriormente presentar el antígeno en los órganos linfáticos y así activar a los linfocitos T e iniciar la activación del sistema inmune adaptativo en el hospedero. Además, Salmonella Typhimurium posee la maquinaria molecular para evadir tanto el sistema inmune innato como el adaptativo para lograr la infección sistémica, pero en muchos puntos de esa evasión aún no se ha esclarecido el funcionamiento y los efectores participantes. En este contexto, el sistema de dos componentes ArcAB resalta como candidato, al participar en la supervivencia y evasión del sistema inmune innato, modulando la supervivencia y evasión del sistema inmune adaptativo. Por consiguiente, en este trabajo se evaluó la activación de linfocitos T, mediante ensayos de presentación de antígenos el cual utiliza como antígeno único, la proteína ovoalbúmina, que es detectada específicamente por linfocito T transgénicos OT-I y OT-II, para linfocitos T CD8+ y CD4+ respectivamente. Estos linfocitos son co-cultivadas con las células dendríticas para la presentación de antígenos y posterior cuantificación de su proliferación y producción de citoquinas de forma in vitro. Para la evaluación de la participación del sistema de dos componentes ArcAB, se generaron cepas mutantes de S. Typhimurium en cada uno de los genes del sistema y una doble mutante ΔarcA-ΔarcB para evaluar la ausencia del sistema completo. También se consideraron como controles mutantes en slyA, como control de virulencia y la mutante en invA como control de invasión celular. Estas mutantes fueron transformados con un plásmido que contiene el gen OVAL para la ovoalbúmina, bajo un promotor constitutivo. Los resultados obtenidos por las mutantes en el sistema de dos componentes fueron distintos entre cada tipo de linfocitos T, observándose una tendencia proliferativa en mutantes del sistema ArcAB en linfocitos CD4+ aun así no significativo, mientras que en linfocito CD8+ no hubo diferencias respecto al control con la cepa silvestre. En base a estos resultados el sistema de dos componentes ArcAB no estaría participando en las condiciones evaluadas de la capacidad de evasión al sistema inmune adaptativo. Pero, varios estudios han descrito otras estrategias de evasión que posee Salmonella Typhimurium en la que puede estar participando el sistema de dos componentes ArcAB, entre ellos están la inhibición por contacto en el cual un variado grupo de efectores participan de este mecanismo y otra forma de evadir es invadiendo linfocitos B en donde la isla de patogenicidad-1 posee un rol fundamental. Además, ArcA es modulador indirecto de la isla de patogenicidad-1 y pueda estar regulando este método de evasión. Finalmente, Salmonella posee varias estrategias de evasión a la respuesta inmune adaptativa en la cual no se descarta la participación del sistema de dos componentes ArcAB.esSalmonella TyphiInvestigacionesTesis