Gil Michell, Fernando RafaelSaavedra Sánchez, ClaudiaGuerrero Escudero, Patricio Juan JoséFacultad de Ciencias BiológicasEscuela de Bioquímica2025-01-272025-01-272013https://repositorio.unab.cl/handle/ria/63314Tesis (Bioquímico, Magíster en Bioquímica)Esta Tesis se desarrolló en el Laboratorio de Microbiologia Molecular de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Andres Bello, fue financiada por el Proyecto FONDECYT N° 11100142 y N° 1130074 y por el Proyecto de Investigación UNAB DI-15-12/R.Durante su ciclo infectivo, Salmonella Typhimurium (S Typhimurium) debe adaptarse a diversos cambios medioambientales. Para ello, debe detectar y responder a las diferentes señales y condiciones a las que se ve enfrentada. Dentro de los mecanismos utilizados por S. Typhimurium y otras bacterias, se encuentran los sistemas de dos componentes (SDC), que consisten de una proteína localizada en la membrana interna y que actúa como un "sensor", y un factor transcripcional localizado en el citoplasma denominado "regulador de respuesta". Los SDC responden a diversas señales, incluyendo cambios en el pH, osmolaridad, antibióticos, etc, entre otras. En este contexto, ha sido reportado que el SDC BaeSR participa en la respuesta a ciprofloxacino (CIP), un antibiótico cuyo mecanismo de acción incluye la producción de la especie reactiva de oxígeno superóxido (Oz ). Para evitar el daño producido por esta molécula oxidante, el genoma de S. Typhimurium codifica tres isoformas de la enzima superóxido dismutasa (SOD), SodA, SodB y SodC, cuya función es la degradación de O . Dado que el SDC BaeSR responde a CIP y que este antibiótico genera OZ , se realizó un análisis in sulco de los promotores de sodA y soda en busca de posibles sitios de unión del regulador BaeR. El análisis predijo la presencia de dos sitios de unión de BaeR en el promotor de sodA (BBS 1 y BBS2), y uno en el promotor de soda (BBS). En base a estos antecedentes, se buscó establecer si el SDC BaeSR activa la expresión de sodA y sodB en respuesta a CIP. Los resultados de esta Tesis demuestran que el SDC BaeSR activa la expresión de sodA en respuesta a CIP a través de una interacción directa con el sitio BBS 1, que esta activación es independiente del regulador SoxS, y que BaeSR es requerido para mantener los niveles basales de soda a través de un mecanismo no identificado.During its infective cycle, Salmonella Typhimurium (S. Typhimurium) must adapt to diverse environmental changes. For this purpose, bacteria must be able to detect and respond to the different stimuli and conditions it encounters. Among the mechanisms used by S. Typhimurium and other bacteria, are the denominated two component systems (SDC), which consist of a protein localized to the inner membrane that acts as a "sensor", and a transcription factor located in the cytoplasm called the "response regulator". SDC respond to different signals, including changes in pH, osmolarity, antibiotics, etc., among others. In this context, the BaeSR SDC participates in the response to ciproloxacin (CIP), an antibiotic that mediates generation of the reactive oxygen species superoxide (Oz '). To avoid the damage produced by this oxidant molecule, S. Typhimurium genome codes three isoforms of the enzyme superoxide dismutase (SOD), SodA, SodB, and SodC, that degrade Of. Since the BaeSR SDC responds to CIP and this antibiotic generates Of, we performed an in silico analysis in search for BaeR binding sites at the promoter regions of sodA and soda. The analysis predicted the presence of two BaeR binding sites at the promoter region of sodA (BBS1 y BBS2), and one at the promoter of soda (BBS). Based on these observations, in the present work we evaluated if the BaeSR SDC regulates the expression of sodA and soda in response to CIP. The results show that the BaeSR SDC positively regulates sodA expression in response to CIP through a direct interaction with the BBS1 site, that this activation is independent of SoxS, and that BaeSR is required to maintain the basal levels of soda, through an unidentified mechanism.esAntibióticosSuperóxido DismutasasSalmonella TyphimuriumCiprofloxacinoTesis