Mora Longa, GuidoJofré Bartholin, Matías RobertoFacultad de Ciencias de la SaludDepartamento de Ciencias Biológicas2019-03-292019-03-292008http://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/8350Tesis (Bioquímico, Magíster en Bioquímica)Esta tesis fue financiada por el proyecto FONDECYT N° 1060999: "Salmonella enterica serovar Typhi, PATOGENO ESPECÍFICO Y CRÓNICO DEL SER HUMANO: CARACTERIZACIÓN DE MECANISMOS MOLECULARES DE SU PATOGENICIDAD"A través de la evolución Salmonella enterica se ha adaptado a hospederos únicos en los cuales pueda completar su ciclo infectivo con éxito. Algunos de los genes que codifican los productos necesarios de la bacteria para el proceso de infección del hospedero se encuentran codificados en islas de patogenicidad de Salmonella (SPI's), las cuales están presentes en cepas patógenas pero se encuentran ausentes en cepas inocuas. La SPI-18 de Salmonella enterica serovar Typhi posee dos marcos de lectura, hlyE y STY1499. El primero codifica para la hemolisina HlyE, factor de virulencia en la bacteria, y del segundo no se conoce aún su producto ni una función asociada. La SPI- 18 está presente exclusivamente en Salmonella Typhi y Paratyph.i A, serovares restringidos sólo al ser humano y ha sido caracterizada sólo en cuanto al rol que posee la hemolisina HlyE en patogenicidad. Asimismo se desconoce de qué manera y bajo que estímulos son regulados los genes de la SPI -18 en la bactetia. En esta tesis se caractetizó la regulación de la expresión de hlyE y STY1499 para a detem1inar cuales condiciones ambientales asociadas a la virulencia aumentan la expresión de estos genes. Empleando fusiones transcripcionales, RT-PCR e hibridaciones Western se estudió la expresión de ambos genes y se detem1inó que la acidez, la alta osmolaridad y la baja disponibilidad de Mg2 + en el medio de cultivo son condiciones inductoras de la expresión de hlyE y STY1499. Así mismo, se estableció que ambos marcos de lectura se co-transctiben en condiciones estándar de crecimiento y su expresión es coordinada en condiciones de estrés ácido y alta osmolaridad, como también diferencial a bajas concentraciones de Mg2 +. De esta fom1a se detenninó que la SPI-18 cmresponde a un nuevo operón y que las proteínas sintetizadas por hlyE y STY1499 en esta isla podrian estar participando activamente y de fom1a distinta durante la intemación de la bacteria en el lumen intestinal y a la diseminación de ésta en células fagocíticas.Through evolution, Salmonella Typhi has been adapted to a umgue host in which bacteria can successfully complete the infective cycle. Some of the genes that encode necessary products for the infection process are grouped in Salmonella pathogenicity islands (SPI's), which are present in pathogenic bacteria but absent from ham1less strains. The Salmonella ente rica serovar Typhi SPI -18 has two open reading frames, hlyE and STY1499. The hlyE gene encodes the haemolysin HlyE protein, a vimlence factor, and the STY1499 gene has not yet an associated function. The SPI-18 is present in Salmonella Typhi and other serovars, including and Paratyphi A, al! of them restlicted to human, their unigue host. This island has been characterized only in fucntion of the role of HlyE in pathogenicity. Moreover, it is unknown how and under what stinmli the SPI -18 genes are regu1ated in the bacteria. In this work were characterized the regulation of hlyE and STY1499 expression in order to detennine the vim1ence-associated environmental conditions that modu1ate the expression of these genes. Using transcriptional fusions, RT-PCR and Western hybridations, we studied the expression of both genes and detem1ined that low pH, high osmolmity and the low concentrations of Mg2 + are conditions that increase hlyE and STY1499 expression. Moreover, were established that both ORF's are co-transcribed in standard growth conditions, and their expression is both coordinated in acid stress and high osmolarity as al so differential in low Mg2 + concentrations. Thus, were detemlined that SPI -18 conespond to a novel operon and the synthetized proteins by hlyE and STY1499 in this island can be actively involved in a different way, in the intemalization of the bacteria in the intestinallumen and his dissemination in phagocytic cells.esSalmonella EntéricaTesis