Riedel S., ClaudiaGutiérrez González, Barbara CeciliaFacultad de Ciencias BiológicasEscuela de Bioquímica2025-01-282025-01-282018https://repositorio.unab.cl/handle/ria/63326Tesis (Bioquímico, Magíster en Bioquímica)Esta tesis se realizó en el Laboratorio de Biología Celular y Farmacología de la Facultad de Ciencias de la Vida de la Universidad Andrés Bello y fue financiada por el proyecto FONDECYT Na 1161525, por el Instituto Milenio de Inmunología e Inmunoterapia IMIl P09/16-F y proyecto núcleo DI-471-15/N.La hipotiroxinemia (HTX) es una condición que se caracteriza por la disminución de los niveles plasmáticos de 3,5,3'5'-L-tetra-yodo-tironina (T4) mientras que los niveles plasmáticos de 3,4,3'-L-tri-yodo-tironina (T3) y de la hormona estimulante de la tiroides (TSH) permanecen normales. La HTX gestacional es dañina en el feto puesto que genera una impronta irreversible en el feto. Las hormonas tiroideas (HT) tienen un importante rol en el desarrollo intestinal y en la mantención de la homeostasis intestinal ya que estimulan la proliferación de células madres y células epiteliales del intestino. Además, las HT participan del recambio de las células epiteliales intestinales durante toda la vida. Debido a que las células epiteliales intestinales forman la barrera intestinal, la cual es la encargada de permitir y bloquear el paso de moléculas al organismo, es posible que la progenie gestada en HTX tenga alterada la permeabilidad intestinal. En base a estas evidencias se propone la siguiente hipótesis de trabajo: "La hipotiroxinemia gestacional aumenta la permeabilidad intestinal y la inflamación del intestino de la progenie" Para evaluar esta hipótesis propusimos los siguientes objetivos específicos: 1) Evaluar la permeabilidad intestinal de la progenie gestada en hipotiroxinemia; 2) Evaluar la histología intestinal y moléculas relacionadas con inflamación en el intestino de la progenie gestada en hipotiroxinemia. Para llevar a cabo estos objetivos se realizaron ensayos de permeabilidad in vivo utilizando FitCdextrano y HRP y ex vivo utilizando FSA y HRP. Los resultados obtenidos mostraron un aumento significativo de la permeabilidad paracelular a nivel del íleon de la progenie gestada en HTX. El análisis histológico de cortes de íleon teñidos con hematoxilina y eosina mostró mayor infiltrado celular, una mucosa más ensanchada y una submucosa más delgada en la progenie gestada HTX. Patrones similares a un cuadro de inflamación intestinal. Se observó aumento en la expresión del RNA mensajero para HO1 y disminución para el RNA mensajero de NQO 1. Mientras que no se observaron diferencias significativas para los RNA mensajeros ni la proteína de TNFa, INFy e IL-10. El análisis del contenido de proteínas que componen a las uniones estrechas como son ZO-1 y Ocludina mostró que el contenido de ZO-1 en el íleon está disminuido en la progenie gestada en HTX en comparación a la progenie control. Mientras el contenido de ocludina es similar en ambas progenies. Los resultados obtenidos en esta tesis apoyan la hipótesis de que la HTX gestacional imprime en la progenie mayor permeabilidad en la barrera intestinal del ileón. Además, los resultados del análisis histológico de esta tesis sugieren que el ileum de la progenie gestada en HTX presenta un estado inflamatorio basal. Este estado inflamatorio y la mayor permeabilidad de la barrera intestinal del ileum en la progenie gestada en HTX podría ser un factor que contribuyese al desarrollo de patologías como mal de Crohn, enfermedad celiaca o enfermedades del SNC asociadas a mayor permeabilidad intestinal como Parkinson y esquizofrenia.Hypothyroxinemia (HTX) is a condition characterized by plasmatic reduction of 3,5,3'5'-Ltetra-yodo-tironina (T4), meanwhile the levels of 3,4,3'-L-tri-yodo-tironina (T3) and TSH remain normal. Gestational HTX is a harmful condition for the offspring affecting the function of the central nervous system (CNS) and immune system. The mechanism that underlie these effects are unknown. Moreover, thyroid hormones (HT) play important roles at the intestine. It has been shown that HTs participate in the maintenance of intestinal homeostasis, stimulate the proliferation of intestinal stem cells and intestinal epithelial cells, and regulate the turnover of intestinal epithelial cells during the whole life. Intestinal epithelial cells form the intestinal barrier that is responsible for the selective passage of molecules from intestinal lumen to the body. Several reports have shown that the proper function of the intestinal barrier is essential for the function of the CNS and immune system. Thus, it could be possible that the progeny gestated in HTX will have altered the permeability of the intestinal barrier favoring the development of alterations at the CNS and immune system. Based on these evidences, we propose the following hypothesis: "Gestational hypothyroxinemia increases the permeability of the intestinal barrier and the inflammation at the intestine of the offspring". To evaluate this hypothesis the following aims are proposed: 1) To evaluate the intestinal permeability of the progeny gestated in hypothyroxinemia. 2) To determine the histology of the intestine and the molecules related to inflammation in the intestine of the offspring gestated in hypothyroxinemia. For that in vivo permeability assays were performed with FITC-dextran and HRP as markers for paracellular and transcellular permeability respectively. To analyze which intestinal region could have altered its permeability, ex vivo permeability assays were performed with Ussing chambers and FSA and HRP as markers for paracellular and transcellular permeability respectively. A significant increase of the paracellular permeability was detected in the ileum of the offspring gestated in HTX. The histology analysis indicated an increase in the width of the mucosa layer, a reduction in the width of the submucosa layer and an increase of cellular infiltrate at the mucosa layer of the offspring gestated in HTX. These results suggest that the offspring gestated in HTX could have an inflammatory state in the intestine. The relative expression analysis of the transcripts codifying for proteins of the antioxidant machinery showed a significant increase in the relative expression of HO mRNA and a significant decrease of the relative expression of NQO1 mRNA. The intestine content of TNFct, IFNy and IL-10 were similar between the offspring gestated in HTX and control. The content of tight junction proteins as ZO-1 and Occludin in the intestine were analyzed by western blot. No significant differences were observed in the content of Occludin and a significant decrease in the content of ZO-1 was observed in the ileum of the progeny gestated in HTX. In summary, the results of this thesis support the hypothesis that gestational HTX increases the paracellular permeability of the intestinal barrier at ileum. Moreover, the histological analysis of the ileum from the offspring gestated in HTX has an inflammatory basal state. This inflammatory state plus the higher permeability in the ileum in the offspring gestated in HTX could be a factor that could contribute to the development of pathologies like celiac disease, Crohn disease, Parkinson disease or schizophrenia.esHipotiroxinemia GestacionalHormonas TiroideasInflamación (Medicina)Tesis