Valenzuela, PabloWilhlem Bavestrelllo, VivianManosalva Contreras, HeaddyFacultad de Ciencias de la VidaEscuela de Ingeniería en Biotecnología2020-08-272020-08-272007http://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/15084Tesis (Doctor en Biotecnología)Streptococcus phocae es un patógeno emergente en la industria de la salmonicultura chilena. Este patógeno es el principal responsable del síndrome por cocáceas Gram positivas que afecta al salmón del Atlántico, causando importantes pérdidas económicas a las empresas. El control de esta enfermedad se basa actualmente en el uso de antibióticos, lo cual tiene un fuerte impacto ecológico, además de la problemática de comercializar salmones con trazas de antibióticos. Por lo tanto, en este trabajo se desarrolló como un método preventivo una vacuna experimental para salmones basada en una mezcla de antígenos recombinantes contra S. phocae. A partir de un salmón infectado se obtuvo un aislado bacteriano (Spl), identificado como S. phocae a través de la secuencia del gen de RNA ribosomal de 16s. En esta tesis se demostró que el patógeno es capaz de infectar salmones pre-smolt y smolt en agua temperada dulce o salobre a una temperatura óptima de 16OC. Además se obtuvo un segundo aislado (2868) a partir de un pez infectado con el aislado Spl, el cual fue más virulento, provocando tres veces más mortalidad en los peces que Spl en las mismas condiciones. Proteínas de S. phocae, cuyos ortólogos se localizan en la pared de especies de Streptococcus relacionados filogenéticamente con S. phocae, y confieren una determinada protección contra el correspondiente patógeno, fueron seleccionadas como potenciales candidatos para la vacuna experimental. Basándose en los dominios conservados de éstas, fueron diseñados partidores degenerados para amplificar las regiones codificantes de las chaperonas Hsp6O y Hsp70, Soda, los receptores de transportadores ABC de metales FebP y PsaA y las proteínas de superficie Sip y PrtS de S. phocae mediante PCR. Las regiones codificantes fueron clonadas en el vector de expresión bacteriano pET2la, lográndose una abundante expresión de las proteínas recombinantes en E. coli. El potencial antigénico de las proteínas fue evaluado in silico. Como resultado, Hsp70, PsaA, Sip y PrtS presentaron los más altos índices de antigenicidad. Esto fue confirmado experimentalmente. Salmones inmunizados con una mezcla de estas mismas proteínas mostraron una respuesta inmune humoral potenciada. Por lo tanto, la vacuna fue formulada con una mezcla de estas cuatro proteínas, extracto de E. coli y adyuvante de Freund incompleto. Alevines de salmón del Atlántico fueron vacunados con la preparación y desafiados en las condiciones óptimas de infección del patógeno, el desafío mostró una efectiva protección en salmón del Atlántico contra S. phocae, con un porcentaje relativo de sobrevivencia (RPS) de un 81%. Además, se demostró que el extracto de E. coli y el adyuvante de Freund incompleto presentes en la formulación multicomponente tienen un importante rol en la protección.esSalmonEnfermedadesCostos EconómicosPrevención y ControlImpacto EcológicoChileTesis