Reyes, ArielMarchant Soto, Cristian Leonardo2022-10-132022-10-132019https://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/24260Tesis (Doctor en Biociencias Moleculares)La migración celular es un proceso biológico altamente regulado durante el desarrollo y vida de un organismo. Esta conducta migratoria, se lleva a cabo gracias al proceso de la transición epitelial-mesenquimática(EMT),que se caracteriza por un recambio en las moléculas de adhesión, regulado por genes de la familia SNAIL y TWIST, los cuales a su vez reprimen transcripcionalmente el genCDH1 (E-cadherina). Las células de la cresta neural son un tejido pluripotente que realiza eventos de EMT. En ese sentido, datos de nuestro laboratorio mostraron evidencias que el factor inducido por hipoxia (Hif-1), es necesario para la correcta migración de la cresta neural (NCCs) neural en Xenopus laevis. Recientemente, también hemos reportado que la NCCs de pez cebra es un tejido no hipóxico, y que la estabilización de Hif-1α en este tejido, dependería entre otros, del factor de crecimiento Pdgf1a.En ese contexto, las vías moleculares que comandan la EMT durante el desarrollo de las NCCs en pez cebra aún no se han determinado. Para lo cual nos hemos preguntado ¿cuál(es) son los represores transcripcionales que regulan la EMT durante el desarrollo de la cresta neural? y ¿cuál(es) de ellos son regulados por Hif-1?Para contestar esta pregunta hipotetizamos que: durante la transición epitelial-mesenquimática de las células de la cresta neural del pez cebra, Hif-1 activa la expresión de los factores de transcripción Twist1 y Snail1b,represores transcripcionales, que a su vez reprimen la expresión de E-cadherina. En esta tesis encontramos que los represores de la expresión de E-cadherina,Twist1 y Snail1b,son regulados transcripcionalmente porHif-1, aumentando su expresión con la estabilización de Hif-1durante la migración de las células de la cresta neural del pez cebra. Además, describimos por primera vez que los dos represores transcripcionales, Twist1 y Snail1b, son necesarios para reprimirla expresión de E-c adherida durante la transición epitelial-mesenquimática de las células de la cresta neural. También, demostramos la función in vivo de uno de los represores transcripcionales efectores de la EMT (Twist1) y su rol en la migración de as células de la cresta neural. Por otra parte, identificamos segmentos de ADN cercanos al sitio +1 de inicio de la transcripción, como regiones promotoras que son activadas transcripcionalmente por Hif-1, en genes necesarios para que ocurra correctamente la transición epitelial-mesenquimática:twist1, snail1by cxcr4a.Asimismo, describimos regiones reguladoras en un marcador delaEMT:cdh1En conjunto estos hallazgos, describen la función de genes claves que regulan el programa transcripcional de la transición epitelial-mesenquimática, que son activados por Hif-1 en la cresta neural de pez cebra.Cell migration is a highly regulated biological process during the development and life of an organism.The migratory cellular behavior is carried out thanks to the process of the epithelial-mesenchymal transition (EMT), which is characterized by a change in adhesion molecules, regulated by genes of the SNAIL and TWIST family, which in turn repress transcriptionally the CDH1 gene (E-cadherin).The cells of the neural crest are a pluripotent tissue that performs EMT events. In this sense, data from our laboratory showed evidence that the hypoxia-induced factor (Hif-1) is necessary for the correct migration of the neural crest (NCCs) in Xenopus laevis during embryonic development. Recently, we have also reported that the NCCs of zebrafish is a non-hypoxic tissue, and that the stabilization of Hif-1α in this tissue, would depend among others,on the growth factor Pdgf1a.In this context, the molecular pathways that command EMT during the development of NCCs in zebrafish have not yet been determined. For which we have asked ourselves which are the transcriptional repressors that regulate the EMT during the development of the neural crest? and which one (s) of them are regulated by Hif-1? To answer this question we hypothesize that: during the epithelial-mesenchymal transition of zebrafish neural crest cells, Hif-1 activates the expression of transcription factors Twist1 and Snail1b, transcriptional repressors, which in turn repress the expression of E-cadherin.In this thesis we found that the repressors of the expression of E-cadherin, Twist1 and Snail1b, are regulated transcriptionally by Hif-1, increasing its expression with the stabilization of Hif-1 during the migration of the cells of the neural crest of the zebrafish. . In addition, we describe for the first time that the two transcriptional repressors, Twist1 and Snail1b, are necessary to repress the expression of E-cadherin during the epithelial-mesenchymal transition of the neural crest cells. We also demonstrate the in vivo function of one of the transcriptional repressors effectors of EMT (Twist1) and its role in the migration of neuralcrest cells. On the other hand, we identify DNA segments near the +1 site of transcription initiation, as promoter regions that are activated transcriptionally by Hif-1, in genes necessary for the epithelial-mesenchymal transition to occur correctly: twist1, snail1b and cxcr4a. We also describe regulatory regions in an EMT marker: cdh1.Together these findings describe the function of key genes that regulate the transcriptional program of the epithelial-mesenchymal transition, which are activated by Hif-1in the neural crest of zebrafish.esPez CebraFactores de TranscripciónTesis