Osorio Olivares, FabiolaMedel Fernández, BernarditaFacultad de Ciencias de la Vida2024-04-172024-04-172022https://repositorio.unab.cl/handle/ria/56079Tesis (Doctor en Biotecnología)Las células dendríticas (Dendritic Ce/Is, DCs) son células del sistema inmune necesarias para iniciar y dirigir la respuesta inmune adaptativa. La eficiencia con que estas células activan y controlan la función de los linfocitos T las ha convertido en un objetivo de estudio importante para el desarrollo de inmunoterapias contra diversas patologías. Es por esto que existe un interés especial en conocer los mecanismos intracelulares que controlan la homeostasis y función de las DCs. Uno de estos mecanismos corresponde al sensor de la respuesta a proteínas mal plegadas IRE1 (Inositol Requiring Enzyme 1) el cual ha demostrado regular procesos clave en la respuesta inmune. Este sensor actúa a través de su dominio RNasa mediando el splicíng alternativo del factor de transcripción XBP1s, y también degradando de manera regulada otros mRNAs en un proceso llamado RIDD (Regu!ated IRE1a Dependent mRNA Decay). De manera interesante, se ha descrito que IRE1 tiene un rol crucial en la biología de las cDC1, sin embargo, se desconoce la relevancia de este sensor en los diversos aspectos relacionados con la activación de las cDCls y su funcionalidad. En esta tesis doctoral determinamos la relevancia de IRE1 en el proceso de activación de las cDCls, específicamente en el reconocimiento innato, sobrevida, presentación antigénica y migración de estas células. Utilizando ratones knock out condicionales para IRE1 o XBP1 específicamente en DCs, y el cultivo de DCs derivadas de médulas ósea "Notch-cDCs", determinamos que las Notch-cDCls pueden adquirir dos estados de activación: activación homeostática ( en ausencia de ligandos de receptores de reconocimiento de patrón, PRR) y la activación canónica (en presencia de ligandos de PRR). La activación homeostática depende de XBP1s para la producción de moléculas coestimulatorias y de RIDD para la producción de IL-12p40, siendo importante para la activación de linfocitos T específicos in vivo. Por otro lado, XBP1 y RIDD controlan la producción de citoquinas proinflamatorias en respuesta a Poly I:C como activador canónico de las DCs. En resumen, nuestros resultados posicionan a IRE1 como un regulador emergente de la activación en las cDC1.Dendritic cells (DCs) are cells of the immune system necessary to initiate and direct the adaptive immune response. Their efficiency in activating and controlling T cell function makes DCs an important target to develop immunotherapies against pathologies. Therefore, the intracellular mechanisms that regulate DC function and homeostasis are of great interest in the field. One of these mechanisms is the sensor of the unfolded protein response IREl (Inositol Requiring Enzyme 1), which has shown to be relevant in immune response. IREl signals through its RNase domain, mediating alternative splicing of the XBPls transcription factor and also degrading other mRNAs in a process known as RIDD (Regulated IREla Dependent mRNA Decay). Interestingly, it has been described that IREl has a crucial role in cDCl biology, however, the relevance of IREl in aspects related to cDCl activation and its functionality is still unknown. In this project we determined the relevance of IREl in the activation process of cDCls, specifically in innate recognition, survival, antigenic presentation and migration of these cells. Using conditional knockout mice for IREl or XBPl specifically in DCs, and culture of bone marrow-derived Notch-cDCs, we determined that Notch-cDCl can acquire two activation states: homeostatic activation (in absence of pattern recognition receptor, PRR, ligand) and canonical activation (in presence of PRR ligand). Homeostatic activation depends on XBPl for the production of costimulatory molecules and on RIDD for the production of IL-12p40, being important for the activation of specific T lymphocytes in vivo. On the other hand, XBP1 and RIDD control the production of proinflammatory cytokines in response to Poly I:C as a canonical activator of DCs. In summary, our results qualify IREl as an emerging regulator of the cDCl activation.esCélulas DentríticasProteínasTesis