Saavedra Sánchez, ClaudiaGutiérrez Alvarez, Juan IgnacioFacultad de Ciencias de la SaludEscuela de Bioquímica2019-04-032019-04-032009http://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/8384Tesis (Bioquímico, Magíster en Bioquímica)Este proyecto de tesis fue financiado por el proyecto FONDECYT N° 1050037, FONDECYT No 1085131 y Proyecto UNAB DI -50-09/R.Las membranas interna (MI) y externa (ME) de las bacterias Gram negativo, poseen características propias que las diferencian. La MI contiene una gran variedad de proteínas, a diferencia de la ME, donde existe una menor variedad y todas éstas tienen una estructura terciaria común denominada ,S-barril. Entre las proteínas de la ME se encuentran las porinas, que corresponden a canales acuosos que han sido descritos como vías de entrada para nutrientes, tóxicos y antibióticos. Amplia evidencia genética previa y resultados obtenidos en nuestro laboratorio indican que los genes ompD y omp W de Salmonella enterica serovar Typhimurium (STm), son requeridos para la resistencia y expulsión de un tóxico denominado metil viológeno (MV). Otro gen de nuestro interés es ompL de Salmonella enterica serovar Typhimurium el cual codifica para una porina clásica y ha sido propuesto en Escherichia coli como un canal de salida para pequeñas moléculas oxidadas o reducidas desde el periplasma hacia el espacio extracelular y posiblemente participaría en la mantención del equilibrio redox en el espacio periplasmático. En este trabajo, utilizando técnicas de experimentación in vivo e in vitro se busca demostrar la salida de MV y de glutatión a través de los poros OmpD, OmpL y OmpW de STm. In vivo se demostró que el gen ompL no es requerido en la expulsión de MV pero si en la resistencia al tóxico contrario a lo observado con los genes ompD y omp W. Por otra parte, en los experimentos in vitro se observó que las porinas OmpD y Omp W permiten la difusión de MV desde proteoliposomas cargados con el tóxico, a diferencia de la porina OmpL por la cual no difundió MV. En ensayos de transporte in vitro con proteoliposomas cargados con glutatión, las porinas OmpD, OmpL y Omp W permitieron la difusión del péptido desde proteoliposomas reconstituidos con cada una de estas proteínas.Inner and outer membranes of Gram negative bacteria have different characteristics. Inner membrane (IM) contains a vast variety of proteins, in contrast the outer membrane (OM) which posses a minor diversity of proteins and the most exist in ,6-barrel conformation. Within the outer membrane proteins (OMP's) are the porins which have been described as aqueous channels of nutrients, toxics and antibiotics influx. Previous genetic evidence and results obtained at our laboratory indicates that the ompD and ompW genes of Salmonella enterica serovar Typhimurium (STm) are required for methyl viologen (MV) resistance and for efflux ofthis toxic. ompL gene of STm codifies to a classic porin and it has suggested as a output channel able to expels oxidized and reduced molecules from periplasm to the extracellular medium helping to maintain the periplasmatic redox state. In this study, using in vivo and in vitro analysis methods the goal was to demonstrate the MV and glutathione efflux through OmpD, OmpL an OmpW pores of S Tm. It was demonstrated in vivo that the ompL gene is not required to the MV pumped out but necessary to the resistance in contrast to the observed with ompD and ompWgenes. By other si de, in vitro experiments evidenced that the OmpD and Omp W porins allow to the MV diffusion outside of proteoliposomes previously charged with the toxic. The OmpL porin not showed the same behavior in these in vitro experiments. In vitro transport assays with proteoliposomes charged with glutathione the OmpD, OmpL and OmpW porins allow to the peptide diffusion from reconstituted proteoliposomes with each proteins.esProteínasAnálisisBioquímicaTesis