Loyola Pedevila, AlejandraGarrido Norambuena, Daniel GervasioFacultad de Ciencias BiológicasEscuela de Bioquímica2024-12-312024-12-312017https://repositorio.unab.cl/handle/ria/62882Tesis (Bioquímico, Magíster en Bioquímica)Esta tesis se realizó en el Laboratorio de Cromatina y Epigenética de la Fundación Ciencia y Vida y fue fmanciada por el proyecto ANILLOS ACT 1119 titulado "Mecanismos moleculares del cáncer. Examinando la función de la cromatina en la replicación de HBV y leucemia" proyecto BASAL PFB-16, FONDECYT 1160480 y beca CONICYT 21140956 (Sergio Hernández, 2014).El Virus de la Hepatitis B (HBV) codifica para la proteína X (IiBx), una pequeña proteína no estructural a la cual se le atribuyen múltiples funciones dentro de la célula infectada, tales como controlar el ciclo replicativo viral, regular el ciclo celular y participar en el desarrollo del Carcinoma Hepatocelular (HCC). El transcrito de HBx posee codones internos de inicio de la traducción, lo cual sugiere la traducción de isoformas de HBx. La localización subcelular de HBx varía según su nivel de expresión, localizándose en el núcleo a bajos niveles de expresión y en el citoplasma a altos niveles de expresión. Nuestra hipótesis considera que las isoformas de HBx tienen una localización subcelular distinta cuando son expresadas de manera individual y que varía según su nivel de expresión. Para investigar esto se generaron mutantes que expresan de manera individual cada isoforma, y luego, mediante técnicas de fluorescencia, se determinó la localización subcelular de cada isoforma, variando además su nivel de expresión. Los resultados de microscopía indican que cada isoforma de manera individual presenta una localización subcelular diferente. Además, al expresarlas en combinaciones, la localización final también varía. Finalmente sería importante analizar a futuro cómo estas isoformas interactúan entre sí, siendo de manera directa o mediante otras proteínas, así como también analizar el comportamiento de las isoformas en el contexto viral.Hepatitis B virus (HBV) codes for protein X (HBx), a small non-structural protein with multiple functions within infected cell, such as control the viral replicative cycle, regulate the cell cycle and participate in the development of Hepatocellular Carcinoma (HCC). The HBx transcript has three in-frame translational initiation codons, which suggests the translation of three HBx isoforms. The subcellular HBx localization varies according to its expression level, localizing in the nucleus at low expression levels and in the cytoplasm at high expression levels. Our hypothesis considers that the isoforms of HBx have a different subcellular location when they are expressed individually and varies according to their expression level. To investigate this, different DNA constructs were generated by mutagenesis to individually express each isoform, and then, by indirect immunofluorescence or fluorescence, the subcellular localization of each isoform was determined at different expression levels. In addition, the co-expression of these isoforms was analysed. Microscopy results indicated that each isoform individually exhibits a different subcellular localization. In addition, when expressed in combinations, the fmal location also varied. Finally it would be important to analyse, in the future, how these isoforms interact with one another, directly or through other proteins, as well as to analyse the behaviour of the isoforms in the viral context.esIsoformas de ProteínasHepatitis BTesis