Lladser, AlvaroBorgna, VicenzoHidalgo Triviños, SofíaFacultad de Ciencias de la Vida2023-09-052023-09-052021https://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/53043Tesis (Doctor en Biotecnología)Tesis financiada por ANID AFB-170004, FONDECYT-1171703, FONDECYT- 11190897 y Beca Doctorado ANID 2117154.El carcinoma de células renales (RCC) es un problema de gran relevancia en la salud pública y la economía mundial. La inmunoterapia ha surgido como un tratamiento efectivo que aprovecha la capacidad de los linfocitos T CD8+ para destruir a células tumorales y combatir el cáncer. El bloqueo de receptores inhibitorios, como PD-1, con anticuerpos ha mostrado generar respuestas duraderas en una fracción de pacientes. Aun así, la mayoría de los pacientes no responden a la inmunoterapia. Los linfocitos T CD8+ de memoria residente (Trm) son un subconjunto de linfocitos T CD8+ que se establecen permanentemente en tejidos y tumores, donde median respuestas inmunes innatas y adaptativas superiores. Los linfocitos Trm se caracterizan por la expresión constitutiva de CD69 y, en las barreras epiteliales, también expresan CD103. La infiltración tumoral con linfocitos Trm se ha asociado con mejores resultados clínicos en varios cánceres sólidos. Sin embargo, el rol de los linfocitos Trm en RCC no ha sido estudiado en profundidad. En este trabajo de tesis se describe que los tumores de RCC están enriquecidos en linfocitos Trm, los cuales muestran una expresión aumentada de marcadores asociados a residencia y reactividad antitumoral con respecto a linfocitos T CD8+ de memoria circulante. Mediante análisis transcriptómico de células únicas (single-cell RNAseq) se observó una alta heterogeneidad en linfocitos Trm, encontrando subpoblaciones en distintos estados de diferenciación, tales como como Trm progenitores y Trm terminalmente diferenciados. A su vez, mediante secuenciación de TCR de células únicas (single-cell TCRseq), observamos una mayor expansión clonal en las subpoblaciones de linfocitos Trm, tanto progenitores como terminalmente diferenciados. En ensayos de cocultivo, observamos que los linfocitos Trm poseen una alta reactividad contra células tumorales autólogas, medida como aumento de 4-1BB y producción de IFN-g y TNF-a, pero no reconocen células de tejido renal no maligno. Esta reactividad antitumoral de los linfocitos Trm concuerda con la mayor clonalidad Finalmente, observamos que la presencia de la firma genética de las distintas subpoblaciones de linfocitos Trm se asocia a una mayor sobrevida de pacientes con RCC. Este trabajo muestra que los linfocitos T CD8+ específicos contra células de RCC se encuentran enriquecidos en el compartimiento de memoria residente, posicionando a los linfocitos Trm como un mediador clave en la inmunovigilancia del cáncer renal y un potencial blanco para el desarrollo de nuevas inmunoterapias.Renal cell carcinoma (RCC) is a major problem for public health and economy worldwide. Immunotherapy has emerged as an effective treatment that harnesses the antitumor role of CDS+ T cells. Blockade of inhibitory receptors, such as PD-1, with antibodies has shown durable responses in a limited fraction of patients. Still, most patients do not respond to immunotherapy. Resident memory CDS+ T (Trm) cells are a subset of CDS+ T cells are permanently established in tissues and tumors, where they mediate superior innate and adaptive immune responses. Trm cells are characterized by constitutive expression of CD69 and, at epithelial barriers, also express CD103. Tumor infiltration of Trm cells has been associated with improved clinical outcomes in several solid cancers. However, the role of Trm cells in RCC has not been studied in depth. This thesis work describes that RCC tumors are enriched in Trm cells, which show enhanced expression of markers associated with residence and antitumor reactivity with respect to circulating memory CDS+ T cells. By using single-cell RNA sequencing we observed a high heterogeneity in Trm cells infiltrating RCC tumors, including subsets in different stages of differentiation, such as progenitors and terminally differentiated Trm cells. In addition, by single-cell TCR sequencing we observed a greater clonal expansion in both progenitor and terminally differentiated Trm cells. In coculture assays, we observed that Trm cells display a high reactivity against autologous tumor cells, measured as 4-lBB upregulation and production of IFN-g and TNF-a. Interestingly, Trm cells do not recognize nonmalignant kidney cells. This high antitumor reactivity is consistent with greater clonality ofTrm cells. Moreover, the enrichment of a genetic signature of different Trm cell subsets is associated with a better survival in RCC patients. This work shows that specific CDS+ T cells against RCC cells are enriched in the resident memory compartment, positioning Trm cells as a key mediator in immunosurveillance of RCC and a potential target for the development of new immunotherapies.esCáncer del RiñónLinfocitos TCD8-PositivosInmunologíaTesis