Microdot method: used with chromogenic agar is a useful procedure for sanitary monitoring in aquaculture
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Fecha
2016-09
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en
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Editor
UNIVERSIDAD CATOLICA DE VALPARAISO
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Licencia CC
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Resumen
The microdot method is a downscaling methodology of traditional tenfold serial dilution procedure used in microbiology. The microdot method uses 100 mu L for serial dilution and count colonies in a spot of 10 mu L. In this study we counted colonies directly in a chromogenic agar plate to determine, at the same time, the presence and cell concentration of target bacteria required for sanitary monitoring of Chilean export fishery products. Due to among importers countries the most concerning bacteria included in sanitary monitoring are Escherichia coli, Listeria monocytogenes and Staphylococcus aureus, we used the chromogenic agar; CHROMagar ECC, CHROMagar Listeria and Baird Parker agar, respectively. The results shows no differences between quantitative results obtained with microdot and traditional method during the quantification of a culture of Escherichia coli (1.5 L). The sensitivity and specificity of the microdot method in association with each chromogenic agar was demonstrated in vitro with reference strains. In addition, the usefulness in sanitary monitoring of aquaculture procedures was evaluated in Artemia salina tanks. This method did not detected sanitary problems in surface water. Although other colonies grown in the chromogenic agar plate, their morphological and chromogenic properties not correspond to Escherichia coli, Listeria monocytogenes and Staphylococcus aureus, being identified as Salmonella enterica subsp. enterica, Microbacterium sp., Bacillus sp. and Staphylococcus pasteuri by 16S rRNA gene sequence analysis. Hence, we propose the microdot chromogenic method as a low cost, specific and reliable procedure for sanitary monitoring of aquaculture procedures.
El método de la microgota es una versión a menor escala del procedimiento tradicional de dilución en serie en base diez utilizados en microbiología. El método realiza diluciones en 100 µL y cuenta colonias crecidas en una gota de 10 µL. En este estudio se cuentan colonias directamente en placas cromogénicas para determinar densidad celular y presencia de bacterias requeridas en vigilancia sanitaria de productos pesqueros chilenos de exportación. Entre los requisitos de países importadores, la vigilancia sanitaria involucra frecuentemente a Escherichia coli, Listeria monocytogenes y Staphylococcus aureus, por lo que se utilizan los agares cromogénicos; CHROMagar ECC, CHROMagar Listeria y agar Baird Parker para su identificación. La comparación entre el método de microgota y el método tradicional no muestra diferencias al evaluar un cultivo de Escherichia coli (1,5 L). La sensibilidad y especificidad del método de microgota junto a cada agar cromogénico se demostró in vitro con cepas de referencia. Además, en estanques de Artemia salina se evaluó la utilidad de este método para el monitoreo sanitario. Este método no mostró problemas sanitarios en aguas superficiales, aunque otras colonias crecieron en la placa de agar cromogénico. Sus propiedades morfológicas y cromogénicas no corresponden a Escherichia coli, Listeria monocytogenes y Staphylococcus aureus, siendo identificadas según el análisis de la secuencia del gen 16S rRNA como Salmonella enterica subsp. enterica, Microbacterium sp., Bacillus sp. y Staphylococcus pasteuri. Por lo tanto, se propone el método de microgota cromogénico como un procedimiento de bajo costo, específico y fiable para el monitoreo sanitario en acuicultura.
El método de la microgota es una versión a menor escala del procedimiento tradicional de dilución en serie en base diez utilizados en microbiología. El método realiza diluciones en 100 µL y cuenta colonias crecidas en una gota de 10 µL. En este estudio se cuentan colonias directamente en placas cromogénicas para determinar densidad celular y presencia de bacterias requeridas en vigilancia sanitaria de productos pesqueros chilenos de exportación. Entre los requisitos de países importadores, la vigilancia sanitaria involucra frecuentemente a Escherichia coli, Listeria monocytogenes y Staphylococcus aureus, por lo que se utilizan los agares cromogénicos; CHROMagar ECC, CHROMagar Listeria y agar Baird Parker para su identificación. La comparación entre el método de microgota y el método tradicional no muestra diferencias al evaluar un cultivo de Escherichia coli (1,5 L). La sensibilidad y especificidad del método de microgota junto a cada agar cromogénico se demostró in vitro con cepas de referencia. Además, en estanques de Artemia salina se evaluó la utilidad de este método para el monitoreo sanitario. Este método no mostró problemas sanitarios en aguas superficiales, aunque otras colonias crecieron en la placa de agar cromogénico. Sus propiedades morfológicas y cromogénicas no corresponden a Escherichia coli, Listeria monocytogenes y Staphylococcus aureus, siendo identificadas según el análisis de la secuencia del gen 16S rRNA como Salmonella enterica subsp. enterica, Microbacterium sp., Bacillus sp. y Staphylococcus pasteuri. Por lo tanto, se propone el método de microgota cromogénico como un procedimiento de bajo costo, específico y fiable para el monitoreo sanitario en acuicultura.
Notas
Indexación: Web of Science, Scielo.
Palabras clave
Método microgota, Monitoreo sanitario, Acuicultura, Agar cromogénico, SP-NOV, LISTERIA-MONOCYTOGENES, ESCHERICHIA-COLI, BACTERIA, PERFORMANCE, QUALITY, MEDIA
Citación
Lat. Am. J. Aquat. Res. vol.44 no.4 Valparaíso Sept. 2016