Examinando por Autor "Aedo Abadie, Jorge Eduardo"

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    Efectos de cortisol en la expresión de genes asociados a la respuesta inflamatoria en el músculo esquelético de trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss)
    (Universidad Andrés Bello, 2023) Parada Block, Carolina Alejandra; Valdés, Juan Antonio; Aedo Abadie, Jorge Eduardo; Facultad de Ciencias de la Vida; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    En Chile, es importante la industria de acuicultura debido a que es fundamental en la economía del país, además es considerada como uno de los diez países más importantes en la exportación de salmónidos en especial la trucha arcoíris, importante por la comercialización de su músculo esquelético, y otras especies. Sin embargo, un gran problema que poseen la acuicultura es que los salmónidos pueden sufrir estrés debido a diferentes factores como cambios en el medio ambiente, altas densidades de cultivo, entre otros. El estrés puede afectar negativamente diferentes procesos biológicos como al crecimiento, reproducción osmorregulación e inmunidad. Una manera de enfrentar los factores estresores es el cortisol, la principal hormona que es secretada y que regula la respuesta fisiológica al estrés. Cortisol modula la respuesta estrés a través de su interacción con los receptores de glucocorticoide (GR) y mineralocorticoide (MR). Dentro de los procesos regulados por el cortisol, se encuentra la respuesta inmune y procesos inflamatorios. El estrés agudo afecta de manera que produce un aumento de la proteína C3, citoquinas y sus receptores de quimioquinas como CXCR2, y CXCR4. Para determinar si el cortisol induce la expresión de genes asociados a inflamación en músculo esquelético de trucha arcoíris, mediante las vías GR y MR, se analizaron los genes pro-inflamatorios c3, cxcr2 y cxcr4, además se vio mediante análisis proteico las proteínas CXCR4 e IL-8. El cortisol desencadeno una tendencia al aumento en los genes c3 y cxcr4 del ensayo in vivo, mientras que en el ensayo in vitro c3 no amplifico. A continuación, los niveles de expresión proteicos de IL-8 mostraron una tendencia de aumento regulándose positivamente con cortisol. Por último, se pudo marcar la proteína de CXCR4 en miotubos de trucha arcoíris mediante inmunofluorescencia. Estos resultados sugieren que el músculo esquelético de trucha arcoíris es un tejido inmunológicamente activo, que puede tener como un rol importante estas citoquinas en la respuesta inmune bajo estrés agudo.
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    Molecular mechanisms of the membrane-initiated cortisol actions on the teleost stress response
    (Universidad Andrés Bello, 2019) Aedo Abadie, Jorge Eduardo; Valdés, Juan Antonio; Facultad de Ciencias de la Vida
    La acuicultura es el sector productivo de alimentos de mayor crecimiento abasteciendo cerca del 50% del pescado para consumo mundial. Sin embargo, los peces sometidos a cultivos intensivos sufren de estrés lo que negativamente afecta su crecimiento, reproducción y resistencia a enfermedades. Cortisol es la principal hormona involucrada en la regulación de la respuesta fisiológica al estrés. El actual paradigma respecto a cómo cortisol ejerce sus efectos se relaciona con su mecanismo genómico/clásico de acción que involucra su interacción con receptores intracelulares y la modulación de genes blanco. Sin embargo, cortisol también interacciona con componentes de la membrana plasmática en un mecanismo no-genómico de acción con un impacto desconocido durante la respuesta a estrés. En esta tesis nos propusimos evaluar la contribución de esta nueva acción de cortisol en la respuesta compensatoria al estrés usando dos teleósteos importantes para la acuicultura como modelo, trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss) y la dorada (Sparus aurata). Como primer objetivo diseñamos un ensayo in vivo en el cual O. mykiss y S.aurata fueron administrados intraperitonealmente con cortisol o con su análogo impermeable, cortisol-BSA, para emular una condición de estrés agudo. Este protocolo fue replicado en S.aurata pero administrando ambas versiones de cortisol disueltos en aceite de coco para evaluar efectos a largo plazo iniciados en la superficie. Analizando parámetros de estrés en plasma y tejidos (cortisol, glucosa, lactato, glicógeno), junto con aproximaciones transcriptómicas (RNA-seq, qPCR), evaluamos la movilización de sustratos energéticos, y la respuesta transcripcional del músculo esquelético mediada por esta nueva acción de cortisol en teleósteos. Encontramos que la acción temprana de cortisol, potencialmente mediada por un GR de superficie, contribuye en el incremento de glucosa plasmática y regulación de genes asociados a glicólisis y gluconeogénesis en O. mykiss y S.aurata. Además, esta nueva acción modula diversos procesos biológicos en el músculo esquelético de O. mykiss como el procesamiento de mRNA, procesos catabólicos dependientes de la ubiquitinación de proteínas, regulación de la transcripción, entre otros; además de vías de señalización como fagosoma, adhesión focal y espliceosoma. Como segundo objetivo, analizamos la contribución de la acción de cortisol iniciada en la superficie sobre miotubos aislados de peces, determinando si la señalización de GR participa en este proceso. Por lo tanto, miotubos fueron pre-tratados con RU486 (antagonista de GR) y estimulados con cortisol o cortisol-BSA. Encontramos que la mayoría de los genes relacionados al metabolismo de glucosa, tales como: eno2, pgaml y pepck son potenciales blancos de la acción genómica de cortisol en los miotubos. Sorprendentemente, nuestros resultados sugieren una respuesta bifásica en la regulación de pdk2 en el músculo esquelético; en la que estaría participando primero la vía de cortisol iniciada en la superficie, seguido de la acción genómica. Como tercer objetivo determinamos el potencial receptor de corticoesteroide que mediaría la acción de cortisol iniciada en la superficie mediante el análisis de los niveles de mRNA de grl, gr2 y mr en los ensayos in vivo realizados en O. mykiss y S. aurata y también en los ensayos in vitro. Encontramos que cortisol-BSA rápidamente disminuye la expresión de gr2 y luego incrementa su expresión bajo este mismo tratamiento. Estos resultados sugieren que gr2 es potencialmente el receptor que media la acción de cortisol iniciada en la superficie. Considerando todos los resultados obtenidos en esta tesis, proponemos un nuevo paradigma de acción de cortisol que involucra una participación fundamental de su vía iniciada en la superficie celular durante la respuesta a estrés en teleósteos.