Examinando por Autor "Aguirre Soto, Alejandro"

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    Evaluación de la señalización retrógrada de BDNF y su relación con el endosoma de reciclaje en cultivos compartimentalizados de neuronas corticales de ratón
    (Universidad Andrés Bello, 2023) Aguirre Soto, Alejandro; Bronfman, Francisca C.; Facultad de Ciencias de la Vida; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    La plasticidad neuronal se encuentra regulada por los factores neurotróficos, dentro de los cuales se ubican las neurotrofinas como NGF, NT-3, NT-4/5 y BDNF, estos interactúan con el receptor de neurotrofinas p75 y con receptores específicos de la familia Trks (por “Tropomyson Kinase receptors”). Específicamente BDNF interactúa con el receptor TrkB lo provoca la dimerización del receptor y posteriormente la internalización del complejo BDNF/TrkB en un endosoma para continuar con la señalización al interior de la célula, este organelo endocítico se denomina, endosoma de señalización. Una vez que continúa la señalización, se desencadena la activación de factores de transcripción como CREB, a través de las quinasas de señalización rio arriba, ERK1/2. La dinámica de los endosomas se encuentra regulada por las GTPasas monoméricas Rabs, dentro de las principales se encuentra Rab11 asociada al reciclaje de endosomas. El transporte de los endosomas se da a través de motores moleculares asociados a microtúbulos, por ejemplo la dineína, relacionada con el transporte retrogrado de cargas celulares. Datos recientes de nuestro laboratorio indican que endosomas de señalización BDNF/TrkB generados en el axón, son capaces de activar CREB y favorecer la arborización dendrítica. Sin embargo, no se ha estudiado si BDNF desde el axón es capaz de regular la actividad de Rab11, favoreciendo la activación de ERK1/2 y CREB en cuerpos celulares. De esta manera nos propusimos como objetivo evaluar si el tratamiento con BDNF en axones activa a la GTPasa Rab11 en los cuerpos celulares, favoreciendo la activación de TrkB y ERK1/2 en neuronas corticales cultivadas de manera compartimentalizada en cámaras de microfluidos. Este sistema permite separar el compartimento de cuerpos celulares y el compartimento donde se encuentran los axones. En base a este estudio, se logró estudiar la distribución de Rab11 en el soma de neuronas corticales en cultivos compartimentalizados y no compartimentalizados, se logró optimizar la producción de una sonda proteica (GST-FIP3) que nos permitirá estudiar la forma activa de Rab11. Por otro lado conseguimos estudiar la activación de pERK1/2 en neuronas corticales de cultivos compartimentalizados y no compartimentalizados bajo el tratamiento de BDNF (30 min y 180 min). Se logró demostrar que BDNF axonal y su receptor pTrkB activo se encuentran en endosomas de señalización en los cuerpos celulares, lo que genera la activación de ERK1/2 ayudando a propagar la señal de BDNF a al núcleo de las neuronas. Finalmente, conseguimos identificar una colocalización parcial de los endosomas de señalización provenientes desde el axón con endosomas de reciclaje utilizando la transferrina como marcador.