Examinando por Autor "Briones Orellana, Macarena Soledad"

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    Determinación de la interacción entre los RNAs mitocondriales no codificantes y proteínas con dominio de unión a RNA de doble hebra
    (Universidad Andrés Bello, 2014) Briones Orellana, Macarena Soledad; Burzio Menéndez, Verónica; Oliveira-Cruz, Luciana; Facultad de Ciencias Biológicas. Escuela de Ingeniería en Biotecnología.
    Nuestro laboratorio identificó una familia de RNAs no codificantes mitocondriales (ncmtRNAs), conformada por transcritos sentido (SncmtRNA) y antisentido (ASncmtRNA), los que están formados por el mtrRNA 16s sentido y antisentido, respectivamente, con un repetido invertido unido covalentemente al extremo 5'. En consecuencia, estos RNAs forman estructuras tallo-asa. Por hibridación in situ, la detección de los ncmtRNAs se relaciona con el estado proliferativo de las células,encontrándose tres fenotipos: 1) en células normales proliferativas se detectan ambos transcritos, 2) en células tumorales solo se detecta el transcrito sentido con una baja detección de los ASncmtRNAs y 3) en células normales no proliferativas no se detecta ninguno de ellos. La interferencia de los ASncmtRNAs induce la muerte selectiva de células tumorales, no así de células normales. Para indagar sobre las funciones de éstos transcritos para así comprender los mecanismos involucrados en los efectos de la interferencia de los ASncmtRNAs, exploramos posibles proteínas que interactúan con ellos en la célula. El análisis de la región de RNA de doble hebra (dsRNA) nos permite considerar una interacción con proteínas que poseen dominios de unión a dsRNA (DRBP). Para este trabajo elegimos como candidatas proteínas involucradas en la vía de microRNA (miRNA) y, adicionalmente, PKR, involucrada en respuesta antiviral frente a dsRNA. Nuestros resultados demuestran la formación de complejos entre el SncmtRNA sintetizado in vitro y proteínas(s), mediante ensayo de cambio en la movilidad electroforética (EMSA). Además, ensayos de inmunoprecipitación a partir de lisados de células SK-MEL-2 (melanoma) y melanocitos humanos normales, muestran una asociación de los ncmtRNAs con DROSHA, DICER, AGO-2 y ADAR-1, sugiriendo un rol de estos transcritos en la vía de RNAi. Por otro lado, la interacción con PKR sugiere la participación de éstos RNAs en inmunidad innata celular. Los resultados obtenidos en esta tesis contribuyen al entendimiento de las funciones de los ncmtRNAs y ayudarán a la aplicación de la interferencia de los ASncmtRNAs para el desarrollo de una terapia antitumoral selectiva y eficaz.