Examinando por Autor "Bruno Urbina, Consuelo"

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    RNA de interferencia en nicotiana benthamiana como modelo para el desarrollo de plantas resistentes a virus
    (Universidad Andrés Bello, 2011) Bruno Urbina, Consuelo; Valenzuela, Pablo; Facultad de Ciencias Biológicas; Doctorado en Biotecnología
    RESUMEN: El cultivo de las vides es uno de los de mayor importancia económica para Chile, sin embargo, se ve afectado por numerosos factores, tanto bióticos como abióticos. Los virus se consideran entre los patógenos de mayor importancia para este cultivo y hasta el momento se han descrito más de 60 especies de virus que afectan vides. La mayoría de ellos se transmiten a través de vectores, como nemátodos o áfidos. Se piensa que las metodologías de propagación a través de estacas serían las responsables del incremento y amplia diseminación de estos virus en los últimos años. No existen antecedentes de resistencia natural en vides frente a la infección por virus y la búsqueda de nuevas variedades resistentes ha sido blanco de muchos esfuerzos en este campo de investigación. En este trabajo se describe el desarrollo de resistencia a virus de vides a través de la inducción de silenciamiento génico en plantas de tabaco. Consideramos de gran importancia trabajar con los virus más comunes en Chile, como son: Grapevine leafroll associated virus 2 y 3, Grapevine virus A, Grapevine fanleaf virus y Grapevine fleck virus, y utilizar secuencias de aislados chilenos para inducir el silenciamiento génico contra los virus. Se realizó un análisis de las secuencias disponibles, se utilizaron mayormente secuencias obtenidas en estudios previos en el laboratorio y se secuenciaron los virus de los que no se disponían secuencias de aislados locales. En este trabajo se presenta el caso de Grapevine fleck virus, para el cual se obtuvo la secuencia del 70% del genoma de un aislado chileno y los fragmentos codificantes para los dominios proteicos conservados de la replicasa viral para otros 3 aislados, con los que se analizó la variabilidad de este virus en Chile. En este trabajo, analizamos la capacidad de diferentes secuencias virales para gatillar el silenciamiento génico en plantas, y probamos la habilidad de algunas de ellas para inducir resistencia frente a la infección con el virus. Se eligieron fragmentos de las secuencias codificantes para proteínas esenciales para el virus, como proteínas de replicación, movimiento, cubierta y proteínas de shock térmico, de los diferentes virus. En este proceso de elección de las secuencias a utilizar para la inducción del silenciamiento génico, nos llamó particularmente la atención tres proteínas de Grapevine leafroll associated virus-3, las que no tienen función putativa asociada y basados principalmente en la similitud de la organización genómica de GLRaV-3 con virus de otra familia, planteamos la hipótesis de que pudieran actuar como supresores del silenciamiento génico. Se desarrolló análisis bioinformáticos para intentar proponer una función putativa para estas tres proteínas de GLRaV-3, los que arrojaron resultados significativos sólo para la proteína p19.6 de GLRaV-3, en la cual se identificó un putativo dominio de unión de RNA doble hebra del tipo arreglos de α-hélices, lo que sin embargo no nos permitió asociarle una putativa función por ser un dominio presente en...