Examinando por Autor "Burzio, Luis"

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    Andes 1537 como alternativa terapéutica para el tratamiento de tumores primarios y metástasis de pacientes con cáncer renal avanzado
    (Universidad Andrés Bello, 2021) Araya Ortega, Mariela Andrea; Burzio, Luis; Facultad de Ciencias de la Vida
    El carcinoma renal (RCC) es un tipo de cáncer localizado en el parénquima renal. Es el sexto cáncer más común en hombres y el décimo en mujeres, con la segunda mayor mortalidad de los cánceres urogenitales. El 30% de los pacientes debutan con metástasis cuando son diagnosticados, y su supervivencia a 5 años es de 9% sin tratamiento. El Carcinoma Renal de Células Claras (ccRCC), corresponde al 75% de los carcinomas renales y es el subtipo más relevante. Uno de los principales problemas del RCC en etapa avanzada es su resistencia a quimio y radioterapia. El desarrollo de terapias dirigidas, inmunoterapias y terapias combinadas ha mejorado la sobrevida de estos pacientes en los últimos años, sin embargo, solo un pequeño subgrupo es capaz de responder y los resultados siguen siendo deficientes, lo que hace imperativo el desarrollo de nuevas alternativas terapéuticas. En nuestro laboratorio se han descrito dos familias de RNAs no codificantes de origen mitocondrial (ncmtRNAs), comprendidos por un transcrito sentido (SncmtRNA) y dos transcritos antisentido (ASncmtRNA-1 y AsncmtRNA-2). La interferencia de los ASncmtRNAs mediante el uso de un oligonucleótido antisentido (ASO) denominado "Andes 1537" dirigido contra este transcrito, provoca la inducción de muerte celular masiva y apoptosis en líneas celulares humanas. Demostramos la muerte celular masiva por apoptosis en 6 cultivos primarios de pacientes con ccRCC metastásico post tratamiento con Andes 1537 in vitro, y detectamos una disminución de proteínas del ciclo celular, tales como Ciclina B1 y D1, el procesamiento de PARP-1, la activación de caspasa-3, la exposición de fosfatidilserina, la disminución de Survivina y la fragmentación del DNA nuclear, e incluso hubo disminución de N-cadherina post tratamiento con Andes 1537, una proteína involucrada en invasión y metástasis. In vitro, terapias dirigidas como Sunitinib, tienen un efecto citotóxico moderado en cultivos primarios de estos pacientes, mientras que Pazopanib, no tiene efecto citotóxico. Andes 1537 contra los transcritos ASncmtRNAs, indujo un retardo del crecimiento tumoral en 2 modelos ortotópicos de xenoinjerto in vivo (usando cultivos primarios PDX21 y PDX46), con una media de peso tumoral 2 a 3 veces menor respecto del grupo control. Los resultados de sobrevida obtenidos mediante un modelo subcutáneo de cáncer renal con células PDX21, en comparación con Sunitinib y una terapia combinada, mostraron que la terapia con Andes 1537 provocó no solo un retardo en el crecimiento tumoral, sino que aumentó la sobrevida de los ratones en comparación al grupo control. El resultado más interesante fue que, no existe diferencia significativa entre la sobrevida del grupo de ratones tratados con Andes 1537 y los ratones tratados con la terapia Sunitinib. Estos resultados obtenidos con cultivos primarios humanos sugieren fuertemente que la interferencia del ASncmtRNA es una nueva alternativa selectiva y eficaz contra el ccRCC humano avanzado.
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    Desarrollo de una elisa para la detección de anticuerpos IgM anti.ipnv en salmón
    (Universidad Andrés Bello, 2002) Soza Ried, Jorge Eugenio; Burzio, Luis; Facultad de Ecología y Recursos Naturales; Escuela de Ciencias del Mar
    Las pérdidas económicas generadas por el virus de la necrosis pancreática infecciosa (IPNV) han conllevado al desarrollo de técnicas para la rápida detección del patógeno y al control de la enfermedad mediante el uso de vacunas. En este contexto, se estudió el desarrollo de un ELISA que permitiría evaluar la respuesta inmune de los peces inmunizados. El primer objetivo fue caracterizar un panel de anticuerpos monoclonales anti-lgM de salmónidos, del cual se seleccionó el anticuerpo 3H7/E1 . Este anticuerpo fue exitosamente conjugado con peroxidasa , constituyendo uno de los componentes importantes en el desarrollo del ELISA. Además se determinó la concentración óptima de virus necesario para la activación de la placa, y la dilución del anticuerpo monoclonal anti-lgM conjugado a peroxidasa. Para la versión indirecta del ELISA, también se evaluó la dilución adecuada de un anti-lgG de ratón conjugado a peroxidasa. Para evaluar el ensayo se utilizó un panel de 49 sueros provenientes de peces vacunados con una virina del virus, y de 50 sueros de peces controles no vacunados. Al asumir un valor de corte ("cut-off') para el ensayo de ELISA de 0,3 0 .0 . a 450 nm, el grupo inmunizado presento un 89% de lecturas por sobre dicho valor, lo que sería equivalente a peces positivos. En el grupo control sólo un 44% de los sueros presentaba títulos de lgM altos contra el virus. Sin embargo, sueros que poseían altas lecturas de anticuerpos antiIPNV reaccionaron positivamente en placas activadas con Piscirickettsia sa/monis. Para determinar la especificidad de las lgM, estas fueron absorbidas con el virus, P. salmonis y otros patógenos de peces. Al absorber las lgM con los otros patógenos de peces se encontró que los títulos contra el virus o contra P. salmonis no fueron afectados. Sin embargo, los resultados de absorción con el virus o con P. salmonis indicaron que existe reacción cruzada de los sueros entre ambos patógenos, lo que sugiere que las lgM presentes en el suero son inespecíficas o reaccionan con epítopos de algunos antígenos que son comunes al virus y a P. salmonis.
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    Production and immune response of recombinant Hsp60 and Hsp70 from the salmon pathogen Piscirickettsia salmonis
    (Sociedad de Biología de Chile, 2005) Wilhelm, Vivian; Soza, Cristian; Martinez, Rodrigo; Rosemblatt, Mario; Burzio, Luis; Valenzuela, Pablo D.T.
    We have isolated and sequenced the genes encoding the heat shock proteins 60 (Hsp60) and 70 (Hsp70) of the salmon pathogen Piscirickettsia salmonis. The sequence analysis revealed the expected two open reading frames that encode proteins with calculated molecular weights of 60,060 and 70,400. The proteins exhibit a 70-80% homology with other known prokaryotic Hsp60 and Hsp70 sequences. The coding regions have been expressed in E. coli as thioredoxin fusion proteins. Both recombinant proteins were shown to elicit a humoral response when injected intraperitoneally in Atlantic salmon and also conferred protection to fish challenged with P. salmonis. The present data will facilitate further studies on the involvement of heat shock proteins in protective immunity of fish to infection by P. salmonis and their potential use in recombinants vaccines against this intracellular pathogen.
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    Virus de la anemia infecciosa del salmón, una mirada hacia la replicación viral y una solución al diagnóstico
    (Universidad Andrés Bello, 2008) Goic Figueroa, Bertsy Lenka; Burzio, Luis; Facultad de Ciencias Biológicas
    El virus de la anemia infecciosa del salmón (ISAV), es un agente etiológico que afecta principalmente a los cultivos de salmón Atlántico, representando el primer aislado de un Orthomyxovirus desde teleostos, siendo clasificado como un nuevo género dentro de la familia. La enfermedad se caracteriza por una severa anemia y altas mortalidades, siendo así un patógeno de alto riesgo. El ciclo replicativo de los Orthomyxovirus incluye una entrada a la célula mediada por receptor, endocitosis, liberación de la ribonucleoproteína y translocación al núcleo donde ocurre tanto la transcripción del mRNA como la replicación del genoma viral. Algunas de las proteínas virales, permanecen en el citoplasma o asociadas a la membrana plasmática, sin embargo, la NP y las polimerasas, migran de regreso al núcleo, donde se asocian con el vRNA nuevamente sintetizado formando una nueva RNP, la cual migra de regreso al citoplasma y la membrana celular. En esta tesis se realizaron estudios del ciclo replicativo del ISAV mediante inmunofluorescencia indirecta, ca-localizaciones por microscopia confocal, hibridaciones in situ y microscopía electrónica que sugieren fuertemente la existencia de una fase nucleolar temprana y una tardía en el aparato de Golgi que involucran tanto a la NP como al vRNA. Estos resultados nos inducen a proponer una ruta alternativa en el ciclo replicativo del ISA V o etapas no descritas para la familia Orthomyxoviridae. Una etapa muy temprana en el ciclo replicativo que involucra al nucléolo, estructura crucial en la regulación del ciclo celular, puede explicar el éxito de la familia viral. Por otro lado, una localización en el aparato de Golgi de partículas virales pre-ensambladas y la utilización de la ruta secretora para la liberación viral, con una clara compartimentalización de los componentes virales puede favorecer un ensamblaje adecuado de los 8 segmentos de RNA, interrogante que ha permanecido abierta y ha sido ampliamente estudiada. Finalmente y utilizando algunos de los anticuerpos monoclonales desarrollados en esta tesis, con los cuales se estudió del ciclo replicativo, se diseñó y desarrolló un test para el diagnóstico del ISAV basado en un ensayo de ELISA, el cual es altamente específico, estable y eficiente en el reconociente viral.