Examinando por Autor "Carracedo Latorre, Pilar"
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Ítem Estandarización de una técnica molecular para el diagnóstico de dermatofitos(Universidad Andrés Bello, 2009) Carracedo Latorre, Pilar; Monárdez Páez, Fabiola; Zambrano Mora, Álvaro; Reyes Arenas, Eugenio; Facultad de Medicina; Escuela de Tecnología MédicaActualmente, el diagnóstico de dermatofitos en Chile se encuentra limitado sólo a las técnicas de cultivo tradicionales, que demoran como mínimo 21 días para obtener un resultado final. Molecularmente, el diagnóstico de dermatofitos en Chile llega sólo a la presencia o ausencia de éstos. Del análisis realizado mediante cuatro métodos de extracción, se obtuvo un 100% de resultados negativos al analizar muestras clínicas, no así el caso de cepas, donde se obtuvo un 95,45% de positividad. Los partidores Derma1 y Derma2, junto a los partidores dPsD1 mostraron 100% de negatividad en muestras clínicas y cepas, contrario a lo observado con TR1 y TR2, los cuales presentaron un 100% de positividad en cepas, no así en muestras clínicas. Posiblemente los resultados negativos observados en muestras clínicas se deben a la complejidad que presenta la ruptura celular de piel, pelo y uñas. En este estudio se propone un protocolo para el diagnóstico de dermatofitos basado en un método de preenriquecimiento, extracción y amplificación. Se observó que el punto clave del pre enriquecimiento es el aporte de oxigeno a través de la agitación constante. De los 4 métodos de extracción analizados, sólo con el método de Tiocianato de Guanidina/Silica (GTS) se obtuvieron resultados a partir de muestras clínicas, aunque con baja reproducibilidad (4,3% ). Con respecto a los partidores utilizados, sólo con TR1 y TR2 se logró confirmar la especificidad y sensibilidad de la técnica previamente estandarizada. Se comprobó que los partidores dPsD1 y Derma1 y 2, ambos diseñados a partir de la secuencia de topoisomerasa II, no amplifican para secuencias de ADN en cepas recolectadas a partir de muestras clínicas