Examinando por Autor "Cornejo Mora, Alberto Jesús"
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Ítem Comparación del proceso de agregación entre monómeros y oligómeros de alfa sinucleína y su remodelamiento mediante moléculas de origen natural in vitro(Universidad Andrés Bello, 2018) Caro Urzúa, Valentina Fernanda; Guzmán Espina, Camila Rocío; Cornejo Mora, Alberto Jesús; Facultad de Medicina; Escuela de Tecnología MédicaAlfa sinucleína es una proteína de 14,5 kDa presente en los terminales presinápticos neuronales. Es el principal componente de los cuerpos de Lewy, agregados anatomopatológicos de la enfermedad de Parkinson (EP), un desorden neurodegenerativo caracterizado por la pérdida de neuronas dopaminérgicas de la sustancia nigra en el cerebro. Alfa sinucleína puede plegarse anormalmente y auto-agregarse formando oligómeros, los cuales presentan una alta cantidad de hoja β. Estas estructuras causan degeneración neuronal, por lo que es necesario buscar moléculas capaces de evitar la agregación proteica y que logren la remodelación del oligómero para evitar el avance de la enfermedad. En esta investigación se realizó una curva de agregación de alfa sinucleína recombinante monitoreada por Tioflavina T, la cual mostró aumento de hoja β entre las 24 y 48 horas. Además, se realizaron ensayos de agregación in vitro utilizando proteína como control de agregación y con moléculas naturales como control de inhibición, evidenciando que la molécula natural A2 es capaz de inhibir el proceso de agregación. Posteriormente, se realizó un dot blot con el anticuerpo monoclonal ASyO5, capaz de reconocer oligómeros de alfa sinucleína utilizando muestras con droga y muestra control de tiempo 0 y 48 horas de incubación. El resultado mostró una disminución en el reconocimiento de oligómeros tratados por una familia de moléculas naturales en comparación con la muestra control. Así, se demuestra que la molécula natural A2 es capaz remodelar las estructuras oligoméricas formadas por la agregación patológica de la proteína, proporcionando potenciales nuevas vías terapéuticas contra la EP.Ítem Efecto de agregados oligoméricos de α-sinucleína sobre el citoesqueleto de células de neuroblastoma SH-SY5Y(Universidad Andrés Bello, 2018) Navarro Poblete, Camilo; Ventura Zapata, Natalia; Zamorano Fuentes, Esteban; Cornejo Mora, Alberto Jesús; Facultad de Medicina; Escuela de Tecnología MédicaLos trastornos neurodegenerativos se definen como proteinopatías, donde se transforma una proteína funcional, en una con plegamiento anómalo, y la acumulación de ésta, conlleva a una pérdida neuronal progresiva. La enfermedad de Parkinson se caracteriza por la acumulación de la proteína sináptica α-sinucleína en neuronas dopaminérgicas; es el componente principal de los cuerpos de Lewy, marcador anatomopatológico de la enfermedad de Parkinson, su presencia se relaciona con la alteración de los procesos de transporte neuronal y axonal, agregados tóxicos, disfunción mitocondrial y muerte neuronal. α-sinucleína puede alterar su conformación y adquirir capacidad autoagregante, formando oligómeros que contienen hoja β. La importancia patogénica de esta proteína se basa en su capacidad de formar oligómeros que deterioran la transmisión sináptica y el funcionamiento neuronal, formando poros en la membrana, que aumentan la permeabilidad y alteran la homeostasis iónica celular, generando un efecto de degeneración y muerte neuronal. Es por esto, que esta unidad de investigación surge por la necesidad de establecer el efecto que ejercen los agregados proteicos sobre el citoesqueleto neuronal y el nivel de citotoxicidad que producen sobre las mismas células. Para esto, se utilizó una línea celular inmortalizada proveniente de neuroblastoma SH-SY5Y, sobre la cual se realizó marcaje inmunofluorescente con anticuerpos tubulina β-III, α-tubulina, y neurofilamentos. Esto no entregó evidencias observables morfológicamente sobre disrupción del citoesqueleto, sin embargo, estadísticamente se obtuvieron diferencias significativas, que indicaron cambios a nivel del citoesqueleto. En paralelo, se realizó la medición de la actividad de la enzima lactato deshidrogenasa (LDH) en el sobrenadante del cultivo celular, dicha medición concuerda con el análisis fluorescente del citoesqueleto, ya que se obtuvieron niveles elevados de LDH, indicando que los oligómeros inducen citotoxicidad.Ítem Evaluación del efecto antiagregante de compuestos naturales, frente a la agregación de α-sinucleína(Universidad Andrés Bello, 2017) Machuca Moreno, Luis Alberto; Cornejo Mora, Alberto Jesús; Facultad de Medicina; Escuela de Tecnología MédicaLa Enfermedad de Parkinson es un trastorno neurodegenerativo, caracterizado por la presencia de tres síntomas principales tales como: (i) rigidez muscular, (ii) bradicinesia y (iii) temblor en reposo, además, puede presentarse inestabilidad postural y disminución de la expresión facial en los pacientes. Epidemiológicamente, afecta al 2-3% de la población mayor a 65 años, elevándose a un 3-5% en mayores de 80 años, presentando predominancia en el sexo masculino, siendo infrecuente antes de los 50 años. Con respecto a la patogénesis de la enfermedad, se describe la presencia de inclusiones citoplasmáticas en neuronas dopaminérgicas ubicadas en la Sustancia nigra pars compacta, llamados cuerpos de Lewy, los cuales poseen como principal compuesto la α-sinucleína. Actualmente el tratamiento es la levodopa, la cual posee un enfoque paliativo de la enfermedad, debido a que disminuye la sintomatología clásica, sin embargo, no evita la progresión de la enfermedad. Es por esto, que surge la necesidad de buscar nuevas alternativas al tratamiento actual, y que actúen evitando la progresión de la enfermedad, específicamente interactuando en el proceso de agregación, debido a los efectos citotóxicos de los oligómeros. Por lo tanto, en este trabajo se evaluó el nivel de inhibición de la agregación que presentaban seis polifenoles derivados del extracto del Rosmarinus officialis, realizando ensayos de agregación in vitro utilizando α-sinucleína recombinante, siendo monitoreados por Tioflavina-T (ThT) luego de 24 horas de incubación. Se realizó un screening de las seis moléculas, realizando posteriormente un ensayo de dosis-respuesta de la molécula que presentó mayor inhibición, para luego separar las estructuras formadas en presencia y ausencia del polifenol mediante cromatografía por exclusión de tamaño. A su vez, se comparó el efecto de la molécula en presencia de un inductor de la agregación, obteniendo diferencias significativas entre ambas condiciones.Ítem Evaluación del efecto inhibitorio de extractos metanólicos de líquenes sobre el proceso de agregación de la proteína tau(Universidad Andrés Bello, 2017) Díaz Castañeda, Esteban Nicolás; Díaz Toro, Juan Ignacio; Cornejo Mora, Alberto Jesús; Facultad de Medicina; Escuela de Tecnología MédicaLa enfermedad de Alzheimer (EA) corresponde a una enfermedad neurodegenerativa y progresiva, responsable de demencia en la población adulta mayor. En etapas tempranas se presenta con alteraciones de la memoria, afasia, apraxias y finalmente en deterioro de masa muscular, llevando al individuo a la incapacidad y dependencia completa. La EA en el 90% de los casos se desarrolla sobre los 60, alcanzando del 10% al 20% entre los 70 - 80 años, siendo más frecuente en mujeres. Si bien no existe un consenso respecto a la etiología de esta enfermedad, se pueden reconocer dos marcadores patológicos fundamentales para el desarrollo de esta, primero, la formación de placas seniles alrededor de neuronas, y en segundo lugar, los agregados de proteína tau, siendo estas últimas de interés para la búsqueda de moléculas con capacidad antiagregante en la presente unidad de investigación. La terapia farmacológica de la EA actualmente es de carácter paliativo y solo es efectiva en el 50% de los pacientes. En consecuencia, diferentes investigaciones se han enfocado en la generación de farmacóforos que traten el avance neurodegenerativo de la enfermedad. Bajo esta premisa, el objetivo de la unidad de investigación fue estudiar el efecto inhibitorio de una batería de 12 moléculas de extractos de líquenes antárticos sobre el proceso de agregación de la proteína tau in vitro, la cual se obtuvo mediante recombinación y expresión en cepas de Escherichia coli y posterior purificación mediante cromatografía líquida de alta precisión (HPLC). Por otro lado, se realizaron ensayos de agregación in vitro donde se expusieron los extractos a proteína tau, siendo estos monitorizados por tioflavina T, una técnica de fluorescencia. Finalmente, se observó que, de esta batería, solo una molécula tuvo un efecto inhibitorio significativo.Ítem Moléculas de origen natural con capacidad anti agregante de α-sinucleina in vitro(Universidad Andrés Bello (Chile), 2015) Aroca Herrera, Rosa María; Vidal Olivares, Patricio Ignacio; Cornejo Mora, Alberto Jesús; Facultad de Medicina; Escuela de Tecnología MédicaLa Enfermedad de Parkinson es uno de los trastorno neuro-degenerativo progresivo del sistema nervioso central que afecta aproximadamente a 4 millones de personas en todo el mundo[1]. Esta enfermedad se caracteriza por la degeneración selectiva de las neuronas dopaminérgicas y debido a la pérdida de función pre sináptica de la proteína α-sinucleína, proceso clave en el desarrollo de la enfermedad [2]. Cuando falla el plegamiento correcto de esta proteína, se produce una agregación anormal dando origen a inclusiones denominados cuerpos de Lewy, los cuales se encuentran en el cerebro de pacientes con la enfermedad de Parkinson [3]. Estos cuerpos contribuyen colectivamente a los síntomas motores de la enfermedad de Parkinson, tales como: temblor en reposo, bradicinesia, y rigidez del tono muscular de las personas que presentan la enfermedad[4]. Estudios han revelado que estas proteínas defectuosas pueden trasladarse a otras células, afectando de esta forma las células sanas que las rodean causando su destrucción[5]. Hasta ahora el método de referencia para el tratamiento en pacientes que sufren síntomas de Parkinson es Levodopa, sin embargo, en tratamientos prolongados los pacientes presentan manifestaciones secundarias como disquinesia comprometiendo más la calidad de vida de estos pacientes [6]. A pesar de los esfuerzos desplegados, no ha sido posible desarrollar un tratamiento no sólo efectivo sino que no presente efectos secundarios para los pacientes. Hasta ahora existen evidencias al menos in vitro, de que las moléculas aisladas de origen natural, tales como polifenoles, poseen un efecto 8 sobre la agregación de α sinucleína [7] [3], aspecto importante dentro del desarrollo de la enfermedad, a pesar que aún no posible elucidar claramente como estas moléculas estarían interactuando con determinados residuos de α-sinucleína, al menos evitarían que estos mismos continúen siendo tóxicos ([3]). Por lo tanto, proponemos en esta unidad de investigación mediante ensayos de fluorescencia por ThT, determinar la capacidad inhibitoria de polifenoles tipo catecoles, sobre el proceso de agregación de la α-sinucleína. En donde uno de los compuestos a utilizar que fue la clovamida obtuvo los efectos antiagregantes que se esperaban, mientras que el otro compuesto que fue el ácido rosmarino no presento actividad antiagregante.Ítem Remodelamiento de agregados de tau frente a la acción de compuestos naturales(Universidad Andrés Bello, 2018) González Campos, Mathias Israel; Zapata Muñoz, Francisca Solange; Cornejo Mora, Alberto Jesús; Facultad de Medicina; Escuela de Tecnología MédicaLa enfermedad de Alzheimer (EA) es un trastorno neurodegenerativo que suele aparecer a partir de los 65 años acompañado de pérdida de memoria, incapacidad de ejecutar movimientos coordinados y alteración en el lenguaje. Es considerada una Tauopatía, debido a que el principal factor involucrado en esta alteración es la proteína Tau, encargada de estabilizar microtúbulos y permitir el transporte axonal. Durante la EA ocurren una serie de desregulaciones, entre ellas, la hiperfosforilación anómala de Tau capaz de formar agregados intermedios conocidos como oligómeros compuestos principalmente por hoja β. Recientes estudios han mostrado que estos son los responsables del daño neuronal, debido a que producen estrés oxidativo activando la respuesta inflamatoria y provocando muerte neuronal. Bajo esta premisa, se evaluó el comportamiento de dichos oligómeros y se verificó si eran capaces de remodelar su estructura. Para esto, primero se aislaron monómeros a partir de proteína recombinante y fueron purificados a través de técnicas cromatográficas. Posteriormente, se obtuvieron estructuras oligoméricas mediante cinética de agregación y se evidenció su intensidad con tioflavina T, la cual posee afinidad por estructuras de hoja β. Finalmente, se probaron una serie de compuestos de origen natural, que se encuentran bajo elucidación estructural, que fueron capaces de inhibir el proceso de agregación de la proteína Tau, lo cual fue evidenciado mediante dot blot, utilizando el anticuerpo T22 que reconoce específicamente oligómeros. De esta manera, se observó que las moléculas naturales seleccionadas son capaces de remodelar la estructura del oligómero y que disminuyen su contenido de hoja β.