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Ítem Babesia vogeli in dogs in Chile(Blackwell Publishing Ltd, 2020-11) Di Cataldo, Sophia; Ulloa-Contreras, Claudia; Cevidanes, Aitor; Hernández, Claudia; Millán, JavierWe report the presence of Babesia vogeli in dogs in Chile. During two surveillance campaigns separated by a year, sixty-three blood samples from free-ranging rural dogs in Coquimbo, Chile, were analysed through conventional PCR screening of the 18S rRNA for Babesia species. Sequencing confirmed the presence of Babesia vogeli in 6.3% of the tested animals, with positive cases in both years. All the sequences showed 100% nucleotide sequence identity among them and 99.8% with other previously published sequences from dogs. No clinical signs or haematological abnormalities other than thrombocytopenia were found in the parasitized individuals. This is the first report of a canine piroplasmid in Chile.Ítem Distribution, transmission and risk factors of infection with canine vector-borne pathogens in wild foxes and free-ranging dogs in Chile(Universidad Andrés Bello, 2021) Di Cataldo, Sophia; Millán Gasca, JavierLos patógenos caninos transmitidos por vectores (CVBP) constituyen un importante grupo de patógenos de distribución mundial que se transmiten por artrópodos y afectan a los cánidos salvajes y domésticos. La distribución de los patógenos transmitidos por vectores tiende a estar circunscrita a ciertas áreas con características climáticas donde sus vectores son capaces de persistir y reproducirse. En este aspecto, Chile posee una marcada variedad de regiones bioclimáticas que proporcionan un escenario ideal para estudiar la distribución de los patógenos transmitidos por vectores. Los CVBP más relevantes (Anaplasma platys, Ehrlichia canis, micoplasmas hemotrópicos, Hepatozoon, piroplásmidos y filarioides) son transmitidos, o presuntamente transmitidos, por garrapatas del grupo de especies Rhipicephalus sanguineus, que están ampliamente presentes en Chile. A pesar de esto, la información sobre la presencia, distribución e impacto del CVBP en caninos domésticos y silvestres en el país es muy escasa y probablemente ha sido poco estudiada. Asimismo, los recientes cambios en el uso del suelo causados por la urbanización y la fragmentación del hábitat han aumentado las probabilidades de transmisión de patógenos entre especies silvestres y perros. Los perros domésticos están muy extendidos en Chile y viven en simpatía con las tres especies de zorros autóctonos presentes en el país: el zorro culpeo (Lycalopex culpaeus), el zorro chilla (L. griseus) y el amenazado zorro de Darwin (L. fulvipes). Estos perros rurales suelen estar en libertad y rara vez reciben tratamiento antiparasitario, lo que puede facilitar aún más la transmisión de los patógenos mencionados. Así, el objetivo principal de la presente tesis fue describir la distribución geográfica y la prevalencia de los CVBP más relevantes en cánidos domésticos y salvajes a lo largo de seis regiones bioclimáticas de Chile. Se predice que estos patógenos estarían asociados a regiones bioclimáticas con características más adecuadas para el establecimiento de sus putativos vectores. Para lograr este objetivo, se obtuvieron muestras de sangre y suero de 981 perros, 155 zorros culpeo, 90 zorros chilla y 82 zorros de Darwin de seis regiones bioclimáticas diferentes de Chile: Desierto Costero, Desierto Montañoso, Estepa, Mediterráneo, Templado Cálido Lluvioso (TWR), y Templado Marítimo Lluvioso (TMR). Se utilizó un conjunto de cebadores para detectar el ADN del CVBP, y pruebas de inmunofluorescencia para la detección de anticuerpos contra algunos de ellos. Las garrapatas y pulgas recuperadas de estos animales se identificaron mediante claves taxonómicas, y los linajes del grupo de especies Rhipicephalus sanguineus se designaron mediante herramientas moleculares. Por último, se dedujeron los factores de riesgo de infección para los distintos hospedadores y el CVBP utilizando modelos lineales generalizados (GLM), modelos lineales mixtos generalizados (GLMM), la prueba de Chi-cuadrado y la prueba de Fischer, según procediera. En el primer capítulo se describió la presencia de ADN y/o anticuerpos contra Anaplasmataceae en 719 perros, 132 zorros culpeo y 82 zorros chilla de las seis regiones estudiadas. Las muestras de sangre de perros y zorros se analizaron primero en busca de ADN de Anaplasmataceae, seguido de dos protocolos específicos de Ehrlichia para inferir coinfecciones. Los anticuerpos contra Anaplasma sp. y E. canis se evaluaron mediante inmunofluorescencia en los perros. Se recogieron e identificaron los ectoparásitos y se determinaron los linajes del grupo de especies de R. sanguineus mediante análisis moleculares y filogenéticos. Por último, se investigaron los posibles factores de riesgo de infección en las distintas regiones bioclimáticas y los distintos huéspedes. Todos los amplicones de ADN obtenidos correspondieron a Anaplasma platys. La presencia tanto de ADN como de anticuerpos de A. platys se confirmó en todas las regiones bioclimáticas, a excepción de aquellas gran altitud y/o sin presencia de ningún linaje del grupo de especies de R. sanguineus. Los perros infestados con garrapatas de R. sanguineus fueron significativamente más propensos a estar infectados y expuestos a Anaplasma spp. La prevalencia del ADN fue significativamente mayor en los perros jóvenes (19%) que en los adultos (9%), mientras que se encontró lo contrario para la seroprevalencia (19% frente al 35%, respectivamente). La prevalencia total del ADN de A. platys fue mayor en los perros (11%) que en los zorros (4%), probablemente debido a una infestación de garrapatas notablemente menor en los zorros. No se detectó ADN de Ehrlichia canis en ninguna muestra, y sólo se detectaron anticuerpos contra este patógeno en cuatro perros, en zonas con ambos linajes de R. sanguineus. Los perros sin confinamiento en Chile podrían estar favoreciendo el mantenimiento de A. platys en todas las zonas aptas para su vector. Aunque aparentemente es poco frecuente, es posible que se produzca infección de perros a zorros, lo que debería tenerse en cuenta en los planes de gestión en Chile. En el segundo capítulo, se analizaron muestras de sangre de 626 perros, 140 zorros culpeo y 83 zorros chilla en busca de ADN de Mycoplasma mediante PCR convencional y posterior secuenciación. Los factores de riesgo de infección se dedujeron mediante modelos lineales mixtos generalizados y la estructura genética mediante análisis de redes. En general, la prevalencia observada de Mycoplasma haemocanis/Mycoplasma haemofelis (Mhc/Mhf) y Candidatus Mycoplasma haematoparvum (CMhp) fue del 24% y el 13% en perros, del 20% y el 7% en zorros culpeo, y del 26% y el 8% en zorros chilla, respectivamente. Ambos hemoplasmas se confirmaron en todas las biorregiones, con mayor prevalencia en aquellas donde las garrapatas del grupo de especies Rhipicephalus sanguineus estaban ausentes. Candidatus Mycoplasma haematominutum y un Mycoplasma sp. previamente encontrado en carnívoros sudamericanos fueron detectados en zorros. Aunque los haplotipos de Mhc/Mhf y CMhp más prevalentes fueron compartidos entre perros y zorros, el análisis de networks reveló una estructura genética de Mhc/Mhf entre huéspedes en algunas regiones. El sexo masculino se asoció a un mayor riesgo de infección por Mhc/Mhf y CMhp en perros, lo que sugiere que la ingestión de sangre, producto de interacciones agresivas, puede ser una vía de transmisión alternativa. No se identificó ningún factor de riesgo en los zorros. Demostramos que los hemoplasmas caninos están muy extendidos en Chile, detectándose en todas las especies muestreadas en todas las biorregiones estudiadas, y que la transmisión interespecífica entre estas especies está teniendo lugar. En el capítulo III se describió la epidemiología de los hemoplasmas en el zorro de Darwin y en los perros simpátricos. Mhc es prevalente en el amenazado zorro de Darwin en la isla de Chiloé, donde se concentra la mayor población de esta especie (aproximadamente 420 individuos). Sin embargo, el origen de la infección, su dinámica, su presencia en otras poblaciones de zorros y las posibles consecuencias para la salud de los zorros siguen sin explorarse. Durante ocho años, se examinó y caracterizó el ADN de este hemoplasma en la sangre de 82 zorros de Chiloé y de otras dos poblaciones de zorros de la misma especie, y de 250 perros sin confinamiento de Chiloé. La prevalencia de Mhc en zorros fue constante durante los años de estudio, y se confirmó la coinfección con Candidatus Mycoplasma haematoparvum en el 30% de los zorros. Ambas especies de hemoplasma se detectaron en las dos poblaciones de zorros del continente y en los perros de Chiloé. Mhc fue significativamente más prevalente y genéticamente más diverso en los zorros que en los perros. Dos de los siete haplotipos de Mhc identificados fueron compartidos entre estas especies. Los análisis de network no mostraron una estructura genética por factores de especie (zorros frente a perros), geográficos (poblaciones insulares frente a continentales) o temporales (años de estudio). La probabilidad de infección por Mhc aumentó con la edad del zorro, pero no se asoció con el sexo, la estación del año o el grado de antropización de los hábitats de cada zorro. Algunos zorros recapturados con años de diferencia fueron infectados con el mismo haplotipo en ambos eventos y no se asociaron alteraciones hematológicas con la infección por hemoplasma, lo que sugiere tolerancia a la infección. En conjunto, nuestros resultados indican que Mhc es endémico en el zorro de Darwin y que predomina la transmisión intraespecífica. Sin embargo, un patógeno tan prevalente en una especie amenazada representa una preocupación que debe ser considerada en las acciones de conservación. En el capítulo IV, se evaluó la presencia y distribución de parásitos transmitidos por vectores en perros, zorros culpeo y zorros chilla. Se estudió la presencia de Hepatozoon, piroplásmidos y nematodos en muestras de sangre de 774 perros rurales sin confinamiento, 154 zorros culpeo y 91 zorros chilla de las seis regiones bioclimáticas. Se detectó una prevalencia del 43% de ADN de Hepatozoon spp. en zorros. Todas las secuencias en el zorro culpeo se asociaron filogenéticamente con H. felis. En los zorros chilla, todas pertenecían al clado de H. americanum, excepto una, que mostró un 100% de identidad con H. canis. La evaluación de los factores de riesgo identificó que los zorros juveniles presentaban una mayor probabilidad de infección por Hepatozoon. Todos los perros resultaron negativos para Hepatozoon. Se encontró ADN de Piroplasmida en el 0,7% de los perros y en ningún zorro. Se detectaron anticuerpos contra Babesia sp. en el 24% de los perros y en el 25% de los zorros. Se observó una asociación positiva entre la presencia de anticuerpos contra Babesia y una elevada carga de Rhipicephalus sanguineus en los perros. Acanthocheilonema reconditum fue el único nematodo detectado en sangre, estando presente en el 1,5% de los perros y en ningún zorro. Nuestro estudio presenta la primera descripción de Babesia en perros y de Hepatozoon en zorros de Chile. Se detectó un cluster para la presencia de Babesia en perros en la región de la Estepa, y se encontró una asociación positiva entre la presencia de anticuerpos contra este piroplásmido y altas cargas de garrapatas del grupo de especies R. sanguineus. A su vez, se detectó una posible preferencia de hospedador entre los zorros para las especies de Hepatozoon. La presencia de parásitos transmitidos por vectores que no habían sido reportados antes en Chile es fundamental para lograr un correcto diagnóstico en perros domésticos, mejorando las medidas de control que pueden beneficiar aún más los planes de conservación de cánidos silvestres simpátricos. Debido al carácter exhaustivo de este trabajo, en el que se estudiaron los CVBP más relevantes en las cuatro especies de cánidos de Chile a través de seis regiones bioclimáticas del país abarcando 3000 km, se considera que este proyecto contribuyó a completar la pobreza de conocimiento en la epidemiología de los patógenos transmitidos por vectores compartidos entre animales domésticos y silvestres en Chile. Los resultados obtenidos pueden ser de utilidad en programas de conservación de la fauna silvestre, así como en la práctica clínica.Ítem Hemoplasmas are endemic and cause asymptomatic infection in the endangered darwin's fox (Lycalopex fulvipes)(American Society for Microbiology, 2020-06-01) Di Cataldo, Sophia; Hidalgo-Hermoso, Ezequiel; Sacristán, Irene; Cevidanes, Aitor; Napolitano, Constanza; Hernández, Claudia V.; Esperón, Fernando; Moreira-Arce, Darío; Cabello, Javier; Müller, Ananda; Millán, JavierMycoplasma haemocanis is prevalent in the endangered Darwin's fox (Lycalopex fulvipes) in its main stronghold, Chiloe Island (Chile). The origin of the infection, its dynamics, its presence in other fox populations and the potential consequences for fox health remain unexplored. For 8 years, hemoplasmal DNA was screened and characterized in blood from 82 foxes in Chiloe and two other fox populations and in 250 free-ranging dogs from Chiloe. The prevalence of M. haemocanis in foxes was constant during the study years, and coinfection with "Candidatus Mycoplasma haematoparvum" was confirmed in 30% of the foxes. Both hemoplasma species were detected in the two mainland fox populations and in Chiloe dogs. M. haemocanis was significantly more prevalent and more genetically diverse in foxes than in dogs. Two of the seven M. haemocanis haplotypes identified were shared between these species. Network analyses did not show genetic structure by species (foxes versus dogs), geographic (island versus mainland populations), or temporal (years of study) factors. The probability of infection with M. haemocanis increased with fox age but was not associated with sex, season, or degree of anthropization of individual fox habitats. Some foxes recaptured years apart were infected with the same haplotype in both events, and no hematological alterations were associated with hemoplasma infection, suggesting tolerance to the infection. Altogether, our results indicate that M. haemocanis is enzootic in the Darwin's fox and that intraspecific transmission is predominant. Nevertheless, such a prevalent pathogen in a threatened species represents a concern that must be considered in conservation actions.Ítem Large-scale survey for canine vector-borne parasites in free-ranging dogs and foxes from six diverse bioclimatic regions of Chile(Elsevier B.V., 2022-05) Di Cataldo, Sophia; Cevidanes, Aitor; Ulloa-Contreras, Claudia; Cabello, Javier; Gambino, Delia; Gargano, Valeria; Hidalgo-Hermoso, Ezequiel; Latrofa, Maria Stefania; Napolitano, Constanza; Sacristán, Irene; Sallaberry-Pincheira, Nicole; Vianna, Juliana; Acosta-Jamett, Gerardo; Vicari, Domenico; Otranto, Domenico; Millán, JavierChile is a large country with a marked range of climate conditions that make it an ideal scenario for the study of vector-borne parasites (VBPs); however, knowledge about their distribution is limited to a few confined areas of this country. The presence of Hepatozoon spp., piroplasmids, Leishmania spp. and filarioids was investigated through molecular and serological methods in blood and serum samples of 764 free-ranging rural dogs, 154 Andean foxes (Lycalopex culpaeus), and 91 South American grey foxes (Lycalopex griseus) from six bioclimatic regions across Chile. Hepatozoon spp. DNA was exclusively detected in foxes (43% prevalence), including sequences closely related to Hepatozoon felis (24.1%; only Andean foxes), Hepatozoon americanum (16.2%; only grey foxes), and Hepatozoon canis (1.25%; in one grey fox). Risk factor assessment identified a higher probability of Hepatozoon infection in juvenile foxes. DNA of piroplasmids was detected in 0.7% of dogs (Babesia vogeli) but in no fox, whilst antibodies against Babesia sp. were detected in 24% of the dogs and 25% of the foxes, suggesting a wider circulation of canine piroplasmids than previously believed. A positive association between the presence of antibodies against Babesia and high Rhipicephalus sanguineus sensu lato burden was observed in dogs. Leishmania spp. DNA and antibodies were detected in 0.8% and 4.4% of the dogs, respectively. Acanthocheilonema reconditum was the only blood nematode detected (1.5% of the dogs and no fox). Differences in prevalence among bioregions were observed for some of the VBPs. These results expand our knowledge about the occurrence of vector-borne parasites in Chile, some of which are firstly reported herein. This information will facilitate the diagnosis of vector-borne diseases in domestic dogs and improve the control measures for both domestic and wild canids. © 2022 Elsevier B.V.Ítem Widespread infection with hemotropic mycoplasmas in free-ranging dogs and wild foxes across six bioclimatic regions of chile(MDPI AG, 2021-05) Di Cataldo, Sophia; Cevidanes, Aitor; Ulloa-Contreras, Claudia; Sacristán, Irene; Peñaloza-Madrid, Diego; Vianna, Juliana; González-Acuña, Daniel; Sallaberry-Pincheira, , Nicole; Cabello, Javier; Napolitano, Constanza; l Hidalgo-Hermoso, Ezequie; Javier MillánBlood samples of 626 rural dogs, 140 Andean foxes (Lycalopex culpaeus), and 83 South American grey foxes (L. griseus) from six bioregions of Chile spanning 3000 km were screened for Mycoplasma DNA by conventional PCR and sequencing. Risk factors of infection were inferred using Generalized Linear Mixed Models and genetic structure by network analyses. Overall, Mycoplasma haemocanis/Mycoplasma haemofelis (Mhc/Mhf) and Candidatus Mycoplasma haematoparvum (CMhp) observed prevalence was 23.8% and 12.8% in dogs, 20.1% and 7.2% in Andean foxes, and 26.5% and 8.4% in grey foxes, respectively. Both hemoplasmas were confirmed in all the bioregions, with higher prevalence in those where ticks from the Rhipicephalus sanguineus species group were absent. Candidatus M. haematominutum and a Mycoplasma sp. previously found in South American carnivores were detected in one fox each. Although the most prevalent Mhc/Mhf and CMhp sequence types were shared between dogs and foxes, network analysis revealed genetic structure of Mhc/Mhf between hosts in some regions. Male sex was associated with a higher risk of Mhc/Mhf and CMhp infection in dogs, and adult age with CMhp infection, suggesting that direct transmission is relevant. No risk factor was identified in foxes. Our study provides novel information about canine hemoplasmas with relevance in distribution, transmission routes, and cross-species transmission. © 2021 by the authors. Licensee MDPI, Basel, Switzerland.Ítem Worldwide occurrence of haemoplasmas in wildlife: Insights into the patterns of infection, transmission, pathology and zoonotic potential(Blackwell Publishing Ltd, 2020-11) Millán, Javier; Di Cataldo, Sophia; Volokhov, Dmitriy V.; . Becker, Daniel JHaemotropic mycoplasmas (haemoplasmas) have increasingly attracted the attention of wildlife disease researchers due to a combination of wide host range, high prevalence and genetic diversity. A systematic review identified 75 articles that investigated haemoplasma infection in wildlife by molecular methods (chiefly targeting partial 16S rRNA gene sequences), which included 131 host genera across six orders. Studies were less common in the Eastern Hemisphere (especially Africa and Asia) and more frequent in the Artiodactyla and Carnivora. Meta-analysis showed that infection prevalence did not vary by geographic region nor host order, but wild hosts showed significantly higher prevalence than captive hosts. Using a taxonomically flexible machine learning algorithm, we also found vampire bats and cervids to have greater prevalence, whereas mink, a subclade of vesper bats, and true foxes all had lower prevalence compared to the remaining sampled mammal phylogeny. Haemoplasma genotype and nucleotide diversity varied little among wild mammals but were marginally lower in primates and bats. Coinfection with more than one haemoplasma species or genotype was always confirmed when assessed. Risk factors of infection identified were sociality, age, males and high trophic levels, and both prevalence and diversity were often higher in undisturbed environments. Haemoplasmas likely use different and concurrent transmission routes and typically display enzootic dynamics when wild populations are studied longitudinally. Haemoplasma pathology is poorly known in wildlife but appears subclinical. Candidatus Mycoplasma haematohominis, which causes disease in humans, probably has it natural host in bats. Haemoplasmas can serve as a model system in ecological and evolutionary studies, and future research on these pathogens in wildlife must focus on increasing the geographic range and taxa of studies and elucidating pathology, transmission and zoonotic potential. To facilitate such work, we recommend using universal PCR primers or NGS protocols to detect novel haemoplasmas and other genetic markers to differentiate among species and infer cross-species transmission. © 2020 Wiley-VCH GmbH