Examinando por Autor "Echenique Berton, Javiera"

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    Uso de oligonucleótidos antisentido contra los RNA mitocondriales no codificantes en células de mieloma de ratón: efecto sobre la viabilidad y proliferación celular
    (Universidad Andrés Bello, 2010) Echenique Berton, Javiera; Villegas, Jaime; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    En el laboratorio de Cáncer de la Fundación Ciencia para la Vida, se ha descrito una familia de RNAs mitocondriales no codificantes (ncmtRNA) que se expresan de manera diferencial dependiendo del tipo celular y, permiten diferenciar una célula normal de una tumoral. Esta familia está compuesta por dos moléculas, el RNA mitocondrial nocodificante sentido (ncmtRNA-S) que es expresado tanto en células normales proliferantes como en células tumorales, pero nó en células en reposo, y dos RNAs mitocondriales antisentido (ncmtRNAs-AS 1 y 2) que se encuentran sobre expresados en células normales proliferantes, pero reprimidos en células tumorales, al igual que en células en reposo. Si bien aún no se ha dilucidado la función que estos ncmtRNAs cumplen, la evidencia experimental muestra que al interferir los ncmtRNAs-AS con oligonucleótidos complementarios, se induce muerte de células tumorales humanas. En consecuencia, se indujo muerte en células de mieloma de ratón (NS0/2) como modelo pre-clínico utilizando ODN-FPS antisentido contra los ncmtRNAs-AS in vitro, y se analizó la vía implicada en la muerte celular. Células mesenquimáticas de médula ósea de ratón (MSC) se usaron como células normales en proliferación. Células NS0/2 y MSC fueron transfectadas con ODN-FPS complementarios a los ncmtRNA durante 24h. El porcentaje de muerte fue determinado por tinción con azul tripán, ensayo de morfología nuclear (DAPI), TUNEL y anexina V. En células NS0/2 el mayor efecto se obtuvo con un oligonucleótido complementario al ncmtRNA-AS, en concentraciones de 50-100 nM, obteniéndose porcentajes de muerte de alrededor del 50%. El tratamiento indujo fragmentación de DNA, exposición de fosfatidilserina y una fuerte disminución en la proliferación celular. Sin embargo, células MSC no se vieron afectadas por el tratamiento. Estos resultados muestran que la "terapia" con oligonucleótido antisentido contra los ncmtRNAs-AS permite inducir una muerte por apoptosis selectiva para células tumorales, lo que permitirá establecer un protocolo aplicable a estudios preclínicos de eliminación ex vivo de células tumorales de médula ósea para autotransplante.