Examinando por Autor "Facultad de Ciencias Biológicas. Escuela de Ingeniería en Biotecnología."

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    Determinación de la interacción entre los RNAs mitocondriales no codificantes y proteínas con dominio de unión a RNA de doble hebra
    (Universidad Andrés Bello, 2014) Briones Orellana, Macarena Soledad; Burzio Menéndez, Verónica; Oliveira-Cruz, Luciana; Facultad de Ciencias Biológicas. Escuela de Ingeniería en Biotecnología.
    Nuestro laboratorio identificó una familia de RNAs no codificantes mitocondriales (ncmtRNAs), conformada por transcritos sentido (SncmtRNA) y antisentido (ASncmtRNA), los que están formados por el mtrRNA 16s sentido y antisentido, respectivamente, con un repetido invertido unido covalentemente al extremo 5'. En consecuencia, estos RNAs forman estructuras tallo-asa. Por hibridación in situ, la detección de los ncmtRNAs se relaciona con el estado proliferativo de las células,encontrándose tres fenotipos: 1) en células normales proliferativas se detectan ambos transcritos, 2) en células tumorales solo se detecta el transcrito sentido con una baja detección de los ASncmtRNAs y 3) en células normales no proliferativas no se detecta ninguno de ellos. La interferencia de los ASncmtRNAs induce la muerte selectiva de células tumorales, no así de células normales. Para indagar sobre las funciones de éstos transcritos para así comprender los mecanismos involucrados en los efectos de la interferencia de los ASncmtRNAs, exploramos posibles proteínas que interactúan con ellos en la célula. El análisis de la región de RNA de doble hebra (dsRNA) nos permite considerar una interacción con proteínas que poseen dominios de unión a dsRNA (DRBP). Para este trabajo elegimos como candidatas proteínas involucradas en la vía de microRNA (miRNA) y, adicionalmente, PKR, involucrada en respuesta antiviral frente a dsRNA. Nuestros resultados demuestran la formación de complejos entre el SncmtRNA sintetizado in vitro y proteínas(s), mediante ensayo de cambio en la movilidad electroforética (EMSA). Además, ensayos de inmunoprecipitación a partir de lisados de células SK-MEL-2 (melanoma) y melanocitos humanos normales, muestran una asociación de los ncmtRNAs con DROSHA, DICER, AGO-2 y ADAR-1, sugiriendo un rol de estos transcritos en la vía de RNAi. Por otro lado, la interacción con PKR sugiere la participación de éstos RNAs en inmunidad innata celular. Los resultados obtenidos en esta tesis contribuyen al entendimiento de las funciones de los ncmtRNAs y ayudarán a la aplicación de la interferencia de los ASncmtRNAs para el desarrollo de una terapia antitumoral selectiva y eficaz.
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    Efecto de Poligodial, Drimenol, Confertifolina y diferentes extractos obtenidos desde Drymis Winteri sobre los procesos de proliferación y muerte celular en diferentes líneas celulares de cáncer
    (Universidad Andrés Bello (Chile), 2013) Tomasoni Orozco, Giácomo Luigi.; Villena, Joan; Martínez, Rolando; Carrasco, Héctor; Facultad de Ciencias Biológicas. Escuela de Ingeniería en Biotecnología.
    El cáncer es la segunda causa de muerte por enfermedad a nivel mundial de acuerdo a datos publicados por la Organización Mundial de la Salud. Dado el impacto a nivel global de esta patología y que el abordaje farmacológico "tradicional" ha tenido un éxito limitado, se torna cada vez más necesario seguir investigando nuevos posibles fármacos, enfocándose no solo en el desarrollo sintético de estos, sino también explorando el sin número de moléculas de origen natural existentes, haciendo especial énfasis en las provenientes de plantas. Es así al explorar como surge una familia de moléculas que desde un punto de vista biológico es muy importante, los Sesquiterpenos. Éstas son moléculas con amplia actividad biológica y que están presentes en gran variedad de plantas, entre ellas una planta autóctona chilena, el "Canelo" (Drymis winteri). Esta planta presenta una gran variedad de sesquiterpenos, de los cuales en este estudio se utilizaron Confertifolina, Drimenol y Poligodial, además de diferentes extractos de la planta obtenidos con acetato de etilo, etanol, hexano, metanol y el aceite esencial. En este estudio se determinó la citotoxicidad tanto de estos compuestos como la de los extractos obtenidos desde Canelo mediante ensayos de viabilidad celular con Sulforodamina B, donde se vio que Poligodial y el extracto metanólico poseen los mayores efectos citotóxicos sobre las células (disminuyen la viabilidad celular). Posteriormente las células tratadas se tiñeron con Hoechst 33342 para observarse que todos los compuestos y extractos inducen condensación y/o fragmentación de la cromatina en las líneas cancerígenas, característica asociada a procesos apoptóticos. A continuación , se realizó un marcaje de las células con Rodamina 123 y analizándose éstas por citometría de flujo para determinar cambios en la permeabilidad de la membrana mitocondrial, ya que la mitocondria es un orgánulo clave en la determinación de la muerte celular programada. Los resultados indicaron que Poligodial es el único compuesto que afecta la permeabilidad de la membrana mitocondrial y que todos los extractos, salvo el aceite esencial, inducen un efecto similar sobre la permeabilidad de la membrana mitocondrial. En cambio, mediante ensayos de actividad de Caspasa 3 , pudimos determinar que solo Poligodial y Confertifolina aumentan la actividad de Caspasa 3 en las líneas tratadas . Finalmente, se determinó que la citotoxicidad inducida por los compuestos y por los extractos estudiados implican de forma directa o indirecta a las proteasas Caspasa 3/7, viéndose estos resultados gracias al análisis de la recuperación de viabilidad celular tras pretratar células con un inhibidor de Caspasa 3/7 y posteriormente tratar con los compuestos y extractos y realizar el ensayo de viabilidad celular con Sulforodamina B en éstas.