Examinando por Autor "Guajardo Contreras, Gabriel Ignacio"

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    Rol antigénico del sitio de N-glicosilación 144 en la hemaglutinina del virus influenza A H1N1
    (Universidad Andrés Bello, 2018) Guajardo Contreras, Gabriel Ignacio; Medina, Rafael A.; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    Durante la adaptación del virus Influenza A (VIA) en el humano, el cambio antigénico es un proceso clave. Este integra mutaciones primordialmente en la glicoproteína hemaglutinina (HA), la cual es la proteína más inmunogénica del virus y reconoce el receptor en las células del hospedero. Un tipo de mutaciones que utiliza el VIA para evadir los anticuerpos preexistentes es la adición de sitios de N-glicosilación, principalmente en HA. Previamente hemos demostrado que la glicosilación en la posición 144 de la HA H1N1 induce una respuesta policlonal capaz de neutralizar otras variantes de H1N1 N-glicosiladas. A su vez, este sitio de N-glicosilación enmascara de manera efectiva los sitios antigénicos en HA. Estos datos sugieren que el tipo de N-glicosilación en la posición 144 modula las propiedades antigénicas de HA redireccionando la respuesta inmune humoral. Para evaluar las características de este oligosacárido, expresamos de manera soluble la HA del virus H1N1 A/Netherlands/602/09 con N-glicosilaciones adicionales en los sitios 144, 142, 172 y 144-172. Además, produjimos las mismas variantes de HA como virus recombinantes en presencia o ausencia del inhibidor de α-manosidasa I kifunensina, lo que generó N-glicosilaciones del tipo simple o complejas, respectivamente. Mediante Western Blot, observamos que la HA 144 tenía un peso molecular mayor que HA 142 y HA 172, sugiriendo que esta posición permite el ensamble de oligosacáridos más largos en comparación con otros sitios cercanos. Además, observamos que el oligosacárido en la posición 144 afecta negativamente la avidez del VIA por su receptor, pero al reducir la longitud de este (tipo simple) su avidez aumenta significativamente. También se evaluó la relevancia de la posición y tipo de N-glicosilaciones en la cabeza de HA con respecto a su modulación de la respuesta humoral. Se inmunizaron ratones y se determinó que las N-glicosilaciones de tipo complejo producen más anticuerpos contra HA que las de tipo simple. El conjunto de sitios de N-glicosilación 144-172 en HA evaden la respuesta humoral de manera más eficaz que solo el sitio 144 y a su vez inducen anticuerpos que inhiben eficientemente a las otras variantes. Estos resultados proporcionan nuevos conocimientos sobre la relevancia de la N-glicosilación en el sitio 144 HA del VIA y su potencial uso para el desarrollo de vacunas más eficientes.