Examinando por Autor "Lladser, Alvaro"

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    Aislamiento, caracterización y selección de bacteriófagos para la formación de un cóctel contra bacterias del género salmonella involucradas en el síndrome diarreico de origen infeccioso (SDI) en la industria lechera
    (Universidad Andrés Bello, 2017) Mourgues Cuello, Luis Ignacio; Lladser, Alvaro; Ferreira Soto, Nicolás; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    El síndrome diarreico de origen infeccioso (SDI) es un cuadro clínico de causa multifactorial que se origina por la infección de uno o más patógenos al epitelio intestinal. Este síndrome es una de las mayores causas de morbilidad y mortalidad en terneros de lecherías durante los primeros tres meses de vida, generando serias repercusiones económicas a nivel productivo. Entre los agentes causales del SDI se encuentran bacterias del género Salmonella, de las cuales fueron reportadas una alta cantidad de cepas multirresistentes aisladas de bovinos enfermos con SDI a largo del país durante el año 2008, por lo que surge la necesidad de evaluar nuevas alternativas para el control y el tratamiento del SDI. La fagoterapia consiste en el tratamiento de enfermedades de origen bacteriano mediante el uso de bacteriófagos, los cuales son virus que específicamente infectan bacterias. Las principales ventajas del uso de los bacteriófagos son que, debido a su enorme variabilidad, la aparición de bacterias resistentes es menor, sobre todo al momento de utilizar cócteles de bacteriófagos contra una misma bacteria. Por otro lado, son específicos y prácticamente inocuos, siendo así una alternativa segura y eficiente para el tratamiento de enfermedades de origen bacteriano. En este estudio se realizó el aislamiento y caracterización de bacteriófagos para la formulación de un cóctel con actividad antimicrobiana contra cepas de serovares de Salmonella spp. de interés para la industria lechera nacional. De este modo un total de 43 bacteriófagos fueron aislados, de los cuales seis fueron seleccionados según su actividad lítica y rango de hospedero contra los serovares de Salmonella spp. descritos por Peñaloza durante el año 2008. De estos seis bacteriófagos, tres fueron seleccionados como candidatos para la formulación de un cóctel con actividad antimicrobiana contra estos serovares de acuerdo a sus MOI mínimos y tras su caracterización morfológica. Finalmente, un total de dos cócteles fueron formulados, siendo el primero una mezcla entre los bacteriófagos P8 y M7, y el segundo un cóctel conformado por los mismos en adición del bacteriófago T3. Los resultados obtenidos a nivel cualitativo y cuantitativo concluyeron que el cóctel uno posee una actividad antimicrobiana más efectiva y prolongada que la del cóctel dos, cumpliendo los criterios establecidos para su selección. Así, el cóctel uno fue seleccionado bajo el cumplimiento del objetivo de esta tesis.
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    CD73 Ectonucleotidase Restrains CD8+ T Cell Metabolic Fitness and Anti-tumoral Activity
    (Frontiers Media S.A., 2021-02) Briceño, Pedro; Rivas-Yañez, Elizabeth; Rosemblatt, Mariana V.; Parra-Tello, Brian; Farías, Paula; Vargas, Leonardo; Simon, Valeska; Cárdenas, César; Lladser, Alvaro; Salazar-Onfray, Flavio; Elorza, Alvaro A.; Rosemblatt, Mario; Bono, María Rosa; Sauma, Daniela
    CD39 and CD73 are ectoenzymes that dephosphorylate ATP into its metabolites; ADP, AMP, and adenosine, and thus are considered instrumental in the development of immunosuppressive microenvironments. We have previously shown that within the CD8+ T cell population, naïve and memory cells express the CD73 ectonucleotidase, while terminally differentiated effector cells are devoid of this enzyme. This evidence suggests that adenosine might exert an autocrine effect on CD8+ T cells during T cell differentiation. To study the possible role of CD73 and adenosine during this process, we compared the expression of the adenosinergic signaling components, the phenotype, and the functional properties between CD73-deficient and WT CD8+ T cells. Upon activation, we observed an upregulation of CD73 expression in CD8+ T cells along with an upregulation of the adenosine A2A receptor. Interestingly, when we differentiated CD8+ T cells to Tc1 cells in vitro, we observed that these cells produce adenosine and that CD73-deficient cells present a higher cytotoxic potential evidenced by an increase in IFN-γ, TNF-α, and granzyme B production. Moreover, CD73-deficient cells presented a increased glucose uptake and higher mitochondrial respiration, indicating that this ectonucleotidase restrict the mitochondrial capacity in CD8+ T cells. In agreement, when adoptively transferred, antigen-specific CD73-deficient CD8+ T cells were more effective in reducing the tumor burden in B16.OVA melanoma-bearing mice and presented lower levels of exhaustion markers than wild type cells. All these data suggest an autocrine effect of CD73-mediated adenosine production, limiting differentiation and cytotoxic T cells’ metabolic fitness. © Copyright © 2021 Briceño, Rivas-Yañez, Rosemblatt, Parra-Tello, Farías, Vargas, Simon, Cárdenas, Lladser, Salazar-Onfray, Elorza, Rosemblatt, Bono and Sauma.
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    Evaluación del rol antitumoral de linfocitos T CD8+ de memoria residentes en tumores de cáncer renal
    (Universidad Andrés Bello, 2021) Hidalgo Triviños, Sofía; Lladser, Alvaro; Borgna, Vicenzo; Facultad de Ciencias de la Vida
    El carcinoma de células renales (RCC) es un problema de gran relevancia en la salud pública y la economía mundial. La inmunoterapia ha surgido como un tratamiento efectivo que aprovecha la capacidad de los linfocitos T CD8+ para destruir a células tumorales y combatir el cáncer. El bloqueo de receptores inhibitorios, como PD-1, con anticuerpos ha mostrado generar respuestas duraderas en una fracción de pacientes. Aun así, la mayoría de los pacientes no responden a la inmunoterapia. Los linfocitos T CD8+ de memoria residente (Trm) son un subconjunto de linfocitos T CD8+ que se establecen permanentemente en tejidos y tumores, donde median respuestas inmunes innatas y adaptativas superiores. Los linfocitos Trm se caracterizan por la expresión constitutiva de CD69 y, en las barreras epiteliales, también expresan CD103. La infiltración tumoral con linfocitos Trm se ha asociado con mejores resultados clínicos en varios cánceres sólidos. Sin embargo, el rol de los linfocitos Trm en RCC no ha sido estudiado en profundidad. En este trabajo de tesis se describe que los tumores de RCC están enriquecidos en linfocitos Trm, los cuales muestran una expresión aumentada de marcadores asociados a residencia y reactividad antitumoral con respecto a linfocitos T CD8+ de memoria circulante. Mediante análisis transcriptómico de células únicas (single-cell RNAseq) se observó una alta heterogeneidad en linfocitos Trm, encontrando subpoblaciones en distintos estados de diferenciación, tales como como Trm progenitores y Trm terminalmente diferenciados. A su vez, mediante secuenciación de TCR de células únicas (single-cell TCRseq), observamos una mayor expansión clonal en las subpoblaciones de linfocitos Trm, tanto progenitores como terminalmente diferenciados. En ensayos de cocultivo, observamos que los linfocitos Trm poseen una alta reactividad contra células tumorales autólogas, medida como aumento de 4-1BB y producción de IFN-g y TNF-a, pero no reconocen células de tejido renal no maligno. Esta reactividad antitumoral de los linfocitos Trm concuerda con la mayor clonalidad Finalmente, observamos que la presencia de la firma genética de las distintas subpoblaciones de linfocitos Trm se asocia a una mayor sobrevida de pacientes con RCC. Este trabajo muestra que los linfocitos T CD8+ específicos contra células de RCC se encuentran enriquecidos en el compartimiento de memoria residente, posicionando a los linfocitos Trm como un mediador clave en la inmunovigilancia del cáncer renal y un potencial blanco para el desarrollo de nuevas inmunoterapias.
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    IRE1α activation in bone marrow-derived dendritic cells modulates innate recognition of melanoma cells and favors CD8+ T cell priming
    (Frontiers Media S.A., 2019-01) Medel, Bernardita; Costoya, Cristobal; Fernandez, Dominique; Pereda, Cristian; Lladser, Alvaro; Sauma, Daniela; Pacheco, Rodrigo; Iwawaki, Takao; Salazar Onfray, Flavio; Osorio, Fabiola
    The IRE1α/XBP1s signaling pathway is an arm of the unfolded protein response (UPR) that safeguards the fidelity of the cellular proteome during endoplasmic reticulum (ER) stress, and that has also emerged as a key regulator of dendritic cell (DC) homeostasis. However, in the context of DC activation, the regulation of the IRE1α/XBP1s axis is not fully understood. In this work, we report that cell lysates generated from melanoma cell lines markedly induce XBP1s and certain members of the UPR such as the chaperone BiP in bone marrow derived DCs (BMDCs). Activation of IRE1α endonuclease upon innate recognition of melanoma cell lysates was required for amplification of proinflammatory cytokine production and was necessary for efficient cross-presentation of melanoma-associated antigens without modulating the MHC-II antigen presentation machinery. Altogether, this work provides evidence indicating that ex-vivo activation of the IRE1α/XBP1 pathway in BMDCs enhances CD8+ T cell specific responses against tumor antigens. © 2007 - 2019 Frontiers Media S.A. All Rights Reserved.
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    Purinergic Signaling as a Regulator of Th17 Cell Plasticity
    (PUBLIC LIBRARY SCIENCE, 2016-06) Fernández, Dominique; Flores-Santibáñez, Felipe; Neira, Jocelyn; Osorio-Barrios, Francisco; Tejón, Gabriela; Nuñez, Sarah; Hidalgo, Yessia; Fuenzalida, Maria Jose; Meza, Daniel; Ureta, Gonzalo; Lladser, Alvaro; Pacheco, Rodrigo; Acuña-Castillo, Claudio; Guixé, Victoria; Quintana, Francisco J.; Bono, Maria Rosa; Rosemblatt, Mario; Sauma, Daniela
    T helper type 17 (Th17) lymphocytes, characterized by the production of interleukin-17 and other pro-inflammatory cytokines, are present in intestinal lamina propria and have been described as important players driving intestinal inflammation. Recent evidence, supporting the notion of a functional and phenotypic instability of Th17 cells, has shown that Th17 differentiate into type 1 regulatory (Tr1) T cells during the resolution of intestinal inflammation. Moreover, it has been suggested that the expression of CD39 ectonucleotidase endows Th17 cells with immunosuppressive properties. However, the exact role of CD39 ectonucleotidase in Th17 cells has not been studied in the context of intestinal inflammation. Here we show that Th17 cells expressing CD39 ectonucleotidase can hydrolyze ATP and survive to ATP-induced cell death. Moreover, in vitro-generated Th17 cells expressing the CD39 ectonucleotidase produce IL-10 and are less pathogenic than CD39 negative Th17 cells in a model of experimental colitis in Rag-/- mice. Remarkably, we show that CD39 activity regulates the conversion of Th17 cells to IL-10-producing cells in vitro, which is abrogated in the presence of ATP and the CD39-specific inhibitor ARL67156. All these data suggest that CD39 expression by Th17 cells allows the depletion of ATP and is crucial for IL-10 production and survival during the resolution of intestinal inflammation.
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    Stat3 activation in combination with nf-kappab inhibition induces tolerogenic dendritic cells with high therapeutic potential to attenuate collagen-induced arthritis
    (Journal of Immunology Research, 2019) Prado, Carolina; Ugalde, Valentina; González, Hugo; Figueroa, Alicia; López, Ernesto; Lladser, Alvaro; Pacheco, Rodrigo
    Dendritic cells (DCs) have the ability to induce tolerance or inflammation in response to self-Antigens, which makes them fundamental players in autoimmunity. In this regard, immunogenic DCs produce IL-12 and IL-23 favouring the acquisition of Th1 and Th17 inflammatory phenotypes, respectively, by autoreactive CD4+ T-cells, thus promoting autoimmunity. Conversely, tolerogenic DCs produce IL-10 and TGF-β, inducing the generation of CD4+ T-cells with suppressive activity (Treg), which promote tolerance to self-constituents. Previous studies have shown that STAT3 signalling in DCs attenuates the production of proinflammatory cytokines, whilst NF-kB activation promotes it. In this study, we aimed to generate DCs displaying strong and constitutive tolerogenic profile to be used as immunotherapy in autoimmunity. To this end, we transduced bone marrowderived DCs with lentiviral particles codifying for a constitutively active version of STAT3 (constitutively active STAT3 (STAT3ca)) or with a constitutive repressor of NF-kB (IkBα superrepressor (IkBαSR)), and their therapeutic potential was evaluated in a mouse model of arthritis induced by collagen (CIA). Our results show that STAT3ca transduction favoured the production of the anti-inflammatory mediator IL-10, whereas IkBαSR transduction attenuated the expression of the proinflammatory cytokine IL-23 in DCs. Moreover, both STAT3ca-Transduced and IkBαSR-Transduced DCs separately exerted a mild but significant therapeutic effect reducing the severity of CIA development. Furthermore, when DCs were transduced with both STAT3ca and IkBSR together, they reduced CIA manifestation significantly stronger than when transduced with only STAT3ca or IkBαSR separately. These results show STAT3 and NF-kB as two important and complementary regulators of the tolerogenic behaviour of DCs, which should be considered as molecular targets in the design of DC-based suppressive immunotherapies for the treatment of autoimmune disorders.