Examinando por Autor "Medina, Rafael A."

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    Caracterización epidemiológica y evolutiva del virus de influenza A en cerdos de Chile
    (Universidad Andrés Bello, 2016) Saavedra Maass, Marcos; Medina, Rafael A.; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    El virus de Influenza A (VIA) circula endemicamente en poblaciones de cerdos y humanos, además de otras especies en la naturaleza, presentando una preocupación constante a la Salud Pública y a la industria de producción animal a nivel mundial. Estudios de vigilancia de estos agentes infecciosos ha sido una preocupación creciente para la industria de cerdos en Chile, la cual se encuentra dentro de las mayores exportadoras de carne de cerdo en el mundo. Chile tiene barreras ecológicas fuertes, y una alta rigurosidad respecto al traspaso de animales vivos por las fronteras. Sin embargo, desde el año 2009, una circulación constante de VIA ha sido observada en cerdos. A pesar de esto, hay una capacidad de diagnóstico y vigilancia muy limitada en cuanto a la detección de estos virus en el país. En este trabajo estandarizamos herramientas de diagnóstico y subtipificación para identificar y caracterizar la diversidad de los VIA porcinos y su prevalencia en granjas locales de cerdo. También analizamos la prevalencia viral y las características genómicas de los VIA encontrados en estos sitios de producción. Estudios serológicos mostraron que hay una alta prevalencia de varias cepas de VIA, con una tasa de infección general de un 56,9% en diferentes poblaciones de cerdos. Al genotipificar hemos identificado la co-circulación de tres subtipos de VIA, teniendo hasta dos cepas circulantes por sitio. Nuestros datos indican que la mayoría de los cerdos son susceptibles a la infección entre los 70 y 110 días de edad (cerdos en engorda). Cuando obtuvimos muestras de este grupo, aislamos 57 virus de distintos sitios de producción, en comparación a los 3 que habíamos aislado de muestras previas. Secuenciación y análisis de genoma completo de 26 de estos virus reveló múltiples cepas co-circulando en cerdos, además de una cepa recombinante. Adicionalmente, los análisis filogenéticos sugieren un evento de transmisión de un VIA humano a hospedero porcino. Esto es particularmente evidente desde el surgimiento del virus pandémico H1N1 del 2009, el cual ha sido introducido en múltiples ocasiones a la población de cerdos chilenos. En resumen, este trabajo ha permitido el primer estudio comprehensivo de diversidad y evolución de los virus de VIA porcinos en Chile, y coloca en perspectiva la amenaza que estos pueden causar no sólo a cerdos, si no que a la salud humana también.
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    Rol antigénico del sitio de N-glicosilación 144 en la hemaglutinina del virus influenza A H1N1
    (Universidad Andrés Bello, 2018) Guajardo Contreras, Gabriel Ignacio; Medina, Rafael A.; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    Durante la adaptación del virus Influenza A (VIA) en el humano, el cambio antigénico es un proceso clave. Este integra mutaciones primordialmente en la glicoproteína hemaglutinina (HA), la cual es la proteína más inmunogénica del virus y reconoce el receptor en las células del hospedero. Un tipo de mutaciones que utiliza el VIA para evadir los anticuerpos preexistentes es la adición de sitios de N-glicosilación, principalmente en HA. Previamente hemos demostrado que la glicosilación en la posición 144 de la HA H1N1 induce una respuesta policlonal capaz de neutralizar otras variantes de H1N1 N-glicosiladas. A su vez, este sitio de N-glicosilación enmascara de manera efectiva los sitios antigénicos en HA. Estos datos sugieren que el tipo de N-glicosilación en la posición 144 modula las propiedades antigénicas de HA redireccionando la respuesta inmune humoral. Para evaluar las características de este oligosacárido, expresamos de manera soluble la HA del virus H1N1 A/Netherlands/602/09 con N-glicosilaciones adicionales en los sitios 144, 142, 172 y 144-172. Además, produjimos las mismas variantes de HA como virus recombinantes en presencia o ausencia del inhibidor de α-manosidasa I kifunensina, lo que generó N-glicosilaciones del tipo simple o complejas, respectivamente. Mediante Western Blot, observamos que la HA 144 tenía un peso molecular mayor que HA 142 y HA 172, sugiriendo que esta posición permite el ensamble de oligosacáridos más largos en comparación con otros sitios cercanos. Además, observamos que el oligosacárido en la posición 144 afecta negativamente la avidez del VIA por su receptor, pero al reducir la longitud de este (tipo simple) su avidez aumenta significativamente. También se evaluó la relevancia de la posición y tipo de N-glicosilaciones en la cabeza de HA con respecto a su modulación de la respuesta humoral. Se inmunizaron ratones y se determinó que las N-glicosilaciones de tipo complejo producen más anticuerpos contra HA que las de tipo simple. El conjunto de sitios de N-glicosilación 144-172 en HA evaden la respuesta humoral de manera más eficaz que solo el sitio 144 y a su vez inducen anticuerpos que inhiben eficientemente a las otras variantes. Estos resultados proporcionan nuevos conocimientos sobre la relevancia de la N-glicosilación en el sitio 144 HA del VIA y su potencial uso para el desarrollo de vacunas más eficientes.