Examinando por Autor "Opazo Mujica, Loreto Andrea"

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    Identificación del ORF VPA1373 como candidato a efector del T3SS2 del clon pandémico de Vibrio parahaemolyticus
    (Universidad Andrés Bello, 2022) Opazo Mujica, Loreto Andrea; Blondel Buijuy, Carlos José; Facultad de Ciencias de la Vida
    Vibrio parahaemolyticus es una bacteria Gram negativo que es la principal causa de gastroenteritis causada por el consumo de productos del mar a nivel mundial. Esta bacteria posee múltiples factores de virulencia, dentro de los que destacan los Sistemas de Secreción de Proteínas del Tipo III (T3SS). Vibrio parahaemolyticus posee dos T3SS (T3SS1 y T3SS2), cada uno codificado en un cromosoma distinto de la bacteria. Los T3SS son unas nanomáquinas proteicas en forma de aguja, las cuales han evolucionado específicamente para la interacción con células eucariontes. Estos sistemas median la entrega de proteínas, llamadas efectores, directamente desde el citosol de la bacteria hacia el citosol de la célula eucarionte infectada. En este contexto, el T3SS2 es reconocido como uno de los principales factores de virulencia de esta bacteria por su capacidad de generar citotoxicidad in vitro y de ser esencial para la enterotoxicidad causada por V. parahaemolyticus en modelos animales de infección. Actualmente se conocen diez proteínas efectoras de Vibrio parahaemolyticus, no obstante, no se conoce el número total de efectores existentes. Un análisis computacional realizado en el laboratorio llevó a la identificación de una posible señal de secreción en la proteína codificada por el ORF vpa1373, lo que sugiere que VPA1373 sería un nuevo efector del T3SS2. Es así, como este trabajo tiene como objetivo determinar sí VPA1373 corresponde a una proteína efectora del T3SS2. Para este objetivo, en primer lugar, se construyó una fusión génica entre el ORF que codifica VPA1373 y el reportero adenilato ciclasa CyaA, demostrando la producción de la proteína de fusión mediante ensayos de SDS/PAGE y Western Blot, usando anticuerpos específicos anti-CyaA. Finalmente, dicho constructo fue transformado en distintos fondos genéticos de V. parahaemolyticus y se realizó un ensayo de translocación a células Caco-2.