Examinando por Autor "Pedraza Delgado, Diego Antonio"

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    Rol de la proteína chaperona Hfq en el mantenimiento de la homeostasis de la envoltura bajo estrés osmótico en el patógeno de salmónidos Yersinia ruckeri
    (Universidad Andrés Bello, 2023) Pedraza Delgado, Diego Antonio; Calderón, Iván; Acuña Olivares, Lilian; Facultad de Ciencias de la Vida
    Yersinia ruckeri es una bacteria Gram negativo capaz de transitar entre agua dulce y salada. Es un patógeno de salmones que genera brotes de infección en las salmoneras, afectando la producción de salmones a nivel mundial. En el contexto de la exposición a condiciones hiperosmóticas, es sabido que otras bacterias activan sistemas transcripcionales de respuesta a estrés de envoltura, como los sistemas RpoE y CpxAR. A su vez, estos sistemas mantienen la homeostasis de la envoltura bacteriana mediante la síntesis de RNAs pequeños no codificantes (sRNA) que se asocian a la proteína chaperona Hfq y a un mRNA blanco, reprimiendo o promoviendo su expresión para modular la arquitectura del lipopolisacárido (LPS) y de la envoltura celular en conjunto (membrana interna (MI), membrana externa (ME), peptidoglicano (PG)). A la fecha, se desconocen los mecanismos moleculares de respuesta al estrés salino en Y. ruckeri. Por tal razón, en esta Tesis nos propusimos estudiar el rol de Hfq en la respuesta a estrés de envoltura bajo estrés osmótico en Y. ruckeri. Para esto, se utilizó una cepa deficiente del gen hfq (Δhfq) de Y. ruckeri que fue tratada con distintas concentraciones de NaCl para generar la condición de estrés osmótico y realizar análisis fenotípicos como curvas de crecimiento, ensayos de UFC, perfil de proteínas de membrana externa y LPS y microscopías electrónicas (TEM). Por otro lado, se realizaron análisis para evaluar si el estrés generado por el tratamiento con NaCl genera daño en la membrana, lo cual fue evaluado por análisis de citometría de flujo y microscopía electrónica de transmisión, demostrándose que la cepa Δhfq presenta un fenotipo más resistente a altas concentraciones de NaCl, en comparación con la cepa silvestre (WT). Además, se analizó diferencias en los perfiles de proteínas de membrana externa y la composición del LPS, mediante SDS-PAGE, evidenciándose una desregulación respecto al perfil de la cepa WT. Finalmente, se analizó la expresión génica de reguladores mediante RT-qPCR y se observó que la condición de NaCl usada genera estrés por envoltura, aumentando la expresión de genes como rpoE, cpxR, degP y de sRNAs como MicA y CpxQ. Por otro lado, en la cepa Δhfq los niveles de los sRNAs MicA y CpxQ disminuyen significativamente respecto a lo observado en la cepa WT tratada con NaCl. Asimismo, en la cepa Δhfq se observa una desregulación en la expresión de los genes relacionados con la homeostasis de la envoltura bacteriana; ompA/F/C, skp, lpp, rpoE y cpx. En su conjunto, estos resultados indican que la cepa Δhfq presenta diversos fenotipos alterados relacionados con la homeostasis de envoltura, así como también con la resistencia al estrés osmótico, sugiriendo un rol regulatorio de Hfq en la respuesta global a estrés por envoltura gatillado por NaCl.