Examinando por Autor "Reyes Castro, Mauricio"
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Ítem Estudio de la expresión estacional de la proteína H2A.Z durante el proceso de aclimatización del pez cyprinus carpio(Universidad Andrés Bello, 2009) Riquelme Rivera, Claudia Alejandra; Álvarez Santana, Marco; Reyes Castro, Mauricio; Facultad de Medicina; Escuela de Química y FarmaciaEl proceso de aclimatización es definido como el conjunto de mecanismos moleculares implicados en la adaptación natural de un organismo y desarrollados como respuesta a los cambios básicos de su hábitat. En este contexto, el pez Cyprinus carpio debe adaptarse a diversos cambios estacionales, como variaciones de temperatura y fotoperiodo observado durante el transcurso del año. Actualmente existen diversos estudios que permiten postular que, entre los mecanismos moleculares que coordinan la respuesta celular durante el proceso de adaptación, la reprogramación de la expresión génica aparece como uno de los mas esenciales. En células de carpas climatizadas se ha observado que, concomitante al fenomeno de reprogramación génica, el repertorio de proteínas varía durante la adaptación estacional. Un ejemplo de ellas es la histana variante macroH2A, perteneciente a la familia de variantes de la histona clásica H2A, la cual aumenta su expresión durante el invierno comparada con verano y está involucrada en la regulación de la estructura de la cromatina, sugiriendo que mecanismos epigenéticos participarían en la modulación de la respuesta molecular a los cambios estacionales. Además de macroHSA, pertenecen a esta familia las variantes H2A.x H2A-Bbd, H2AvD y H2A.Z. El presente trabajo centrará su atención en la variante de histona H2A.Z. Antecedentes actuales indican que H2A.Z estaría involucrada en el mantenimiento de la homeostasis celular, resultando interesante estudiarla para comprender los mecanismos moleculares que surgen concomitantes al fenómeno de aclimatización estacional de la carpa. Para ello, se amplificó la secuencia codificante de H2A.Z empleando partidores específicos para facilitar la construcción de un vector de expresión. El amplificado resultante fue clonado en un vector de expresión inducible (pET-22b(+)) con el cual se sobreexpresión y purifico la proteína recombinante. La pureza de la preparación fue evaluada mediante geles SDS-PAGE y se utilizó para validar la reacción cruzada del anticuerpo comercial anti-H2A.Z de humano.Ítem Estudio proteómico de factores moleculares que coordinan la reprogramación génica estacional del pez Cyprinus carpio(Universidad Andrés Bello, 2010) Reyes Castro, Mauricio; Alvarez, Marco; Facultad de Ciencias Biológicas; Doctorado en Biociencias MolecularesRESUMEN: El pez Cyprinus carpio es un ectotermo euritermal que habita los ríos de la zona central y sur de Chile. En este escenario, se ve enfrentado a las variaciones físicas del medio ambiente propias de un clima con las estaciones claramente diferenciadas. El fenómeno de plasticidad fenotípica concomitante a las variaciones estacionales se conoce como aclimatización, el cual se ve reflejado a nivel fisiológico, celular y molecular. En la carpa, el cambio más notable se observa en el reordenamiento ultraestructural que sufre el nucléolo, el cual durante la estación veraniega presenta sus componentes integrados (con una alta actividad transcripcional), mientras que en invierno sus componentes se observan segregados (representativo de una baja tasa transcripcional). Nuestra hipótesis de trabajo sostiene que la homeostasis que caracteriza la adaptación estacional de la carpa, implica cambios en el repertorio de proteínas nucleares y en él se representan los factores moleculares centrales para la coordinación de la reprogramación génica estacional de C. carpio. Este estudio, permitió demostrar los cambios que sufre el proteoma nuclear de la carpa concomitante a la adaptación estacional, observándose que aproximadamente un 10% de las proteínas presentes en ambas estaciones son reguladas. Adicionalmente, hemos identificado cinco proteínas, dos no mostraron variación estacional y tres se sobre expresaron durante el invierno. Las identidades de estas proteínas nos sugieren la participación de diversos mecanismos regulatorios de la expresión génica en el proceso de aclimatización. La subunidad Rpb7 es necesaria para el inicio de transcripción y Spt4 participa de la elongación de la transcripción, Pur b se ha descrito como represor de ciertos genes en células musculares, mientras que CENP-A y Actina1 muestran funciones asociadas la estructura de la cromatina. Paralelamente, hemos evidenciado que la histona variante H2A.Z presenta una regulación estacional durante el proceso adaptativo. En particular, esta variante de histona se encuentra enriquecida en los genes ribosomales de la carpa (principalmente en verano), y su relación a través de ensayo de reChIp con marcadores epigenéticos de activación (AcK12H4) y represión (DimetK27H3), nos sugiere su participación en la modulación de la actividad transcripcional de los genes ribosomales durante el fenómeno de aclimatización. Las funciones descritas para estas proteínas, nos sugieren que la regulación de la expresión génica se llevaría a cabo a través de factores XII transcripcionales específicos y de la modulación de la estructura de la cromatina. Esto nos indica la concertación de diversos procesos nucleares, los cuales sustentarían la reprogramación génica cíclica como una de las respuestas compensatorias centrales frente a los cambios medioambientales al que debe hacer frente el pez C. carpio.