Examinando por Autor "Romero, Jaime"

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    Efecto de bacterias lácticas de la microbiota de salmónidos, sobre genes efectores del sistema inmune innato en la línea celular SHK-1
    (Universidad Andrés Bello, 2015) Palma Nuñez, Lorena; Romero, Jaime; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    La microbiota del tracto gastrointestinal ha sido ampliamente estudiada en peces por los potenciales beneficios que presenta, uno de ellos es la estimulación del sistema inmune innato. El sistema inmune innato es la primera barrera de defensa frente a los patógenos, y en peces una cantidad importante de genes relacionados a esta respuesta han sido identificados. Dentro de ellos se encuentran las citoquinas Il-1b, TNF-a e IL-8, óxido nítrico sintasa (iNOS), hepcidina (hep) y lisozima (lys), la proteína del suero amiloide A (SAA) y la ciclooxigenasa 2 (COX-2. En ésta tesis se busca determinar si bacterias de origen láctico, de un set de bacterias provenientes de la microbiota de salmónidos, son capaces de estimular ciertos efectores asociados al sistema inmune innato en la línea celular SHK-1. Las bacterias utilizadas correspondieron a cepas generalmente presentes en la microbiota de salmónidos, tales como, Aeromonas sp (Aehp), Shewanella sp (I8), Pseudomonas sp (P1), Carnobacterium sp (39L y 2A5), Lactococcus sp (B0P1-8) y Pediococcus sp (B022), más dos probióticos comerciales (Bactocell® y Biolactus®). Primero se midió el efecto sobre la integridad de las células SHK-1, donde Aeromonas sp provocó un total desprendimiento de la monocapa a las 48 horas de exposición (hpe), siendo la única bacteria en producir tal daño. Luego, las bacterias fueron clasificadas según su capacidad de proliferación y tiempo de duplicación y de ésta forma normalizar los inóculos iniciales. Se dividió en dos grupos: el grupo 1 correspondió a las bacterias que presentaron un crecimiento más acelerado y fue conformado por las bacterias Aehp, I8, P1 más el probiótico para humanos. El grupo 2 lo forman las bacterias que presentaron un crecimiento más retrasado, que correspondieron a las bacterias B0p1-8, 39L, 2A5, B022 más el probiótico para peces. Para los ensayos de expresión, las bacterias se incorporaron a una MOI 0,1 para el grupo 1 y una MOI 1 para el grupo 2 (inóculo inicial). Para todos los genes, existió un perfil de expresión que se adelantó por parte de las bacterias del grupo 1.En el caso de IL-1b y IL-8, la curva de expresión presenta un pick y luego un descenso paulatino en la mayoría de las bacterias, no así para TNF-a que tras el pick la expresión cae drásticamente en todos los casos. Para el gen iNOS, la expresión es baja para todas las bacterias, siendo para el grupo 2 prácticamente imperceptible. El probiótico para peces, no presenta expresión significativa para ninguno de los genes en estudio, lo que sugiere que éste probiótico no otorga beneficios asociados a la estimulación del sistema inmune innato en peces. Los resultados indican que las bacterias provenientes de la microbiota de salmónidos, son capaces de estimular genes efectores del sistema inmune innato en células SHK-1, siendo candidatas para futuros estudios de probióticos en la industria acuícola. A su vez, el probiótico para humanos resultó ser más eficaz que el probiótico para peces, ya que presenta una mayor estimulación de los genes, sin que ésta respuesta genere una daño a la célula. Sin embargo se necesita un mayor número de ensayos a nivel de organismo completo, para definir si es un mejor probiótico en este caso para peces.
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    Persistent oxytetracycline exposure induces an inflammatory process that improves regenerative capacity in zebrafish larvae
    (Public Library of Science, 2012-05-10) Barros-Becker, Francisco; Romero, Jaime; Pulgar, Alvaro; Feijóo, Carmen G.
    Background: The excessive use of antibiotics in aquaculture can adversely affect not only the environment, but also fish themselves. In this regard, there is evidence that some antibiotics can activate the immune system and reduce their effectiveness. None of those studies consider in detail the adverse inflammatory effect that the antibiotic remaining in the water may cause to the fish. In this work, we use the zebrafish to analyze quantitatively the effects of persistent exposure to oxytetracycline, the most common antibiotic used in fish farming. Methodology: We developed a quantitative assay in which we exposed zebrafish larvae to oxytetracycline for a period of 24 to 96 hrs. In order to determinate if the exposure causes any inflammation reaction, we evaluated neutrophils infiltration and quantified their total number analyzing the Tg(mpx:GFP)i114 transgenic line by fluorescence stereoscope, microscope and flow cytometry respectively. On the other hand, we characterized the process at a molecular level by analyzing several immune markers (il-1β, il-10, lysC, mpx, cyp1a) at different time points by qPCR. Finally, we evaluated the influence of the inflammation triggered by oxytetracycline on the regeneration capacity in the lateral line. Conclusions: Our results suggest that after 48 hours of exposure, the oxytetracycline triggered a widespread inflammation process that persisted until 96 hours of exposure. Interestingly, larvae that developed an inflammation process showed an improved regeneration capacity in the mechanosensory system lateral line. © 2012 Barros-Becker et al.