Examinando por Autor "Saavedra, Claudia."

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    El gen arcA que codifica para el factor transcripcional ArcA de Salmonella Typhimurium es requerido frente a las condiciones de estrés oxidativo encontradas en la infección de neutrófilos murinos
    (Universidad Andrés Bello, 2018) Aguirre Vásquez, Camila Nicole.; Saavedra, Claudia.; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Bioquímica.
    Los neutrófilos eliminan a patógenos sometiéndolos a distintos tipos de estrés, principalmente por la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS). Salmonella Typhimurium sobrevive a estas condiciones gracias a su capacidad de regulación génica, mediado por factores transcripcionales entre los cuales está ArcA, el cual cumple un rol importante en la resistencia bacteriana contra ROS, participa en la regulación del metabolismo celular, biosíntesis flagelar y motilidad. Resultados preliminares muestran que ArcA es requerido en la invasión de neutrófilos murinos y durante la infección sistémica en ratones. Sin embargo, se desconoce cuáles son los genes blancos modulados por éste, que le permitirían a Salmonella adaptarse y responder al estrés en el fagosoma del neutrófilo. Por lo que la hipótesis de este trabajo es "el gen arcA, que codifica para el factor transcripcional ArcA de Salmonella Typhimurium es requerido para la regulación de genes relacionados con la respuesta bacteriana a las condiciones de estrés oxidativo encontradas durante la infección de neutrófilos murinos". Se purificaron e infectaron neutrófilos, extraídos de médula ósea de ratón C57BL16 con las cepas Salmonella Typhimurium 14028s, AarcA y AarcA/pBR::arcA para determinar si el estrés oxidativo generado en el fagosoma del neutrófilo es afectado por la ausencia del gen arcA. Entonces, se evaluó la producción de ROS total, OZ , H2O2 y HOCI y encontramos que en AarcA la producción de ROS total disminuye significativamente. Sin embargo, no hubo cambios en la producción de las especies determinadas individualmente, lo cual sugiere que ArcA influiría en la activación del neutrófilo. Adicionalmente, se midió la concentración de NAD+ en Salmonella durante la infección de neutrófilos, solo se genera mayor concentración de este metabolito en la cepa DarcA en comparación a la cepa silvestre y complementada. Este resultado sugiere que las rutas de consumo de este cofactor se encuentran disminuidas en la mutante lo que generaría una acumulación de NAD+. También se realizó un análisis a nivel transcripcional para poder identificar los posibles blancos regulados por ArcA de genes involucrados en la respuesta a HOCl, virulencia y metabolismo durante la infección de neutrófilos murinos infectados con las cepas Salmonella Typhimurium 14028s AarcA y DarcA/pBR::arcA. Se evaluaron genes que codifican para: - Factores de virulencia, donde son inducidos aquellos relacionados con la formación y mantención de la VCS. - Enzimas destoxificantes y de reparación, de los cuales solo estaba inducido el gen katE y los genes msrA y trxB pertenecientes a sistemas de reparación de proteínas. - Porinas, donde la mayoría se encontraban inducidas y solo la expresión de dos genes estaban reprimidos: ompX y phoE. - Metabolismo central y de aminoácidos, en donde ArcA solamente interviene en la regulación de genes relacionados con e metabolismo de glutamato, lisina, alanina y cisteína. Por lo tanto, los resultados sugieren que la presencia del gen arcA es requerida para la regulación de genes, que en su conjunto permiten a la bacteria adaptarse y responder a las condiciones de estrés generadas en el fagosoma del neutrófilo.