Examinando por Autor "Simon Pino, Felipe"

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    Effect of oral administration of the pharmacological inhibitor of type I TGF-β receptor, GW788388, on fibrosis, organ dysfunction, cardiovascular variables, and survival during endotoxemia
    (Universidad Andrés Bello, 2019) Vallejos Olivos, Alejandro Gabriel; Simon Pino, Felipe; Facultad de Ciencias de la Vida
    Sepsis syndrome is the leading cause of mortality in critically ill patients admitted to intensive care. However, current therapies for sepsis treatment are unsatisfactory, and the mortality rate is still high. The main pathological characteristics observed during sepsis syndrome and endotoxemia include hypotension, tachycardia, MODS, tissue damage, and cytokine and oxidative bursts. These conditions severely decrease the survival rates of endotoxemic patients. As a consequence of endotoxemia, large amounts of endotoxin circulate in the bloodstream throughout the vascular system and interact directly with endothelial cells that cover the inner wall of blood vessels. Endothelial cells exposed to lipopolysaccharides exhibit conversion to activated fibroblasts. By means of endotoxin-induced endothelial fibrosis, endothelial cells downregulate the expression of endothelial proteins and express fibrotic and ECM markers throughout endothelial protein expression reprogramming. Despite that endotoxin-induced endothelial fibrosis should be detrimental to endothelial vascular function, the contribution of endothelial fibrosis during sepsis syndrome or endotoxemia is not known. Therefore, it is investigated whether the inhibition of endotoxin-induced endothelial fibrosis protects against endotoxemia via the main endotoxemia characteristics and whether this inhibition increases survival. The working hypothesis is: Oral administration of the pharmacological inhibitor of fibrosis GW788388 during endotoxemia inhibits fibrosis, pro-inflammatory cytokine production, and oxidative burst, improving cardiovascular variables, MODS and survival rate. The results demonstrate that the inhibition of endotoxin-induced endothelial fibrosis reduced both hypotension and tachycardia. Endotoxemia-induced MODS was also decreased in the endothelial fibrosis-inhibited condition, showing normal kidney and liver function, inhibition of muscle mass wasting and normal glycaemia. Liver and kidney histology were preserved, and organ fibrosis and fibrotic protein expression were reduced. Furthermore, pro-inflammatory cytokine secretion and NOX2-mediated oxidative stress bursts were decreased in the endothelial fibrosis-inhibited condition. Remarkably, the mortality associated with sepsis syndrome at early and late time points was decreased when endotoxemia-induced endothelial fibrosis was inhibited, showing a significant increase in survival. These results show a potential novel treatment strategy to protect against sepsis syndrome and endotoxemia.
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    La expresión del canal iónico TRPM7 es modulada por estrés oxidativo generado en neuronas expuestas a lipopolisacárido
    (Universidad Andrés Bello, 2011) Núñez Villena, Felipe Ignacio; Simon Pino, Felipe; Saavedra, Claudia; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Bioquímica
    Las infecciones bacterianas del sistema nervioso se mantienen como una causa común de mortalidad debido a la ineficacia de las terapias farmacológicas actuales. Entre las infecciones causadas por bacterias Gram negativo, es ampliamente aceptado que las consecuencias fisiopatológicas son producidas principalmente por la acción del lipopolisácarido (LPS) en el sistema nervioso. En el sistema nervioso, es tradicionalmente aceptado que el efecto neurotóxico mediado por el LPS es debido a la previa activación de células microgliales, sin embargo, evidencia reciente sugiere que el LPS podría ejercer un efecto neurotóxico de manera directa, es decir, sin la necesidad de una previa activación de células gliales. Para evaluar los mecanismos implicados en la muerte neurona1 inducida por la exposición a LPS en ausencia de células gliales, se utilizaron dos modelos de estudio: 1- células PC12 diferenciadas y 2- Hippocampal primary neurons (HPNs) deprivadas de glia. Los resultados muestran que el LPS incrementa la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS) y aumenta la expresión del canal iónico TRPM7, proteína con un rol crítico y que está involucrada en la neurotoxicidad provocada por isquemia cerebral. Adicionalmente, utilizando concentraciones moderadas de peróxido de hidrógeno, células PC12 diferenciadas también aumentan la expresión de TRPM7. Para determinar si el aumento de las especies reactivas de oxígeno gatilla el aumento de la expresión de TRPM7, células PC12 diferenciadas fueron expuestas a DTT, un agente altamente reductor. El efecto reductor del DTT impidió el incremento de la expresión de TRPM7 por parte del LPS. Finalmente, células PC12 diferenciadas se expusieron a los inhibidores farmacológicos DPI, inhibidor no selectivo de la NAD(P)H y cheleritrina, inhibidor de la PKC para determinar las fuentes de ROS relacionadas con el aumento de la expresión de TRPM7. El efecto de estos inhibidores impidió el incremento de la expresión de TRPM7 mediada por LPS.
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    Mecanismo regulador del aumento de los niveles de P-Selectina en células endoteliales durante condiciones endotóxicas y estrés oxidativo
    (Universidad Andrés Bello, 2019) Barrionuevo Guerra, Andrea Nathaly; Simon Pino, Felipe; Facultad de Ciencias de la Vida
    El proceso fisiológico de la inflamación surge como respuesta a diversos estímulos relacionados con infecciones o daño tisular que en conjunto con el síndrome clínico grave caracterizado por la presencia de endotoxina, en particular el lipopolisacárido (LPS) desarrolla la patología conocida como sepsis. La sepsis, al ser una enfermedad compleja se encuentra relacionado con varios factores que incrementan la progresión y gravedad de esta patología, uno de estos factores son ROS y el LPS que cuando se encuentran en el torrente sanguíneo interactúan con receptores presentes en las células endoteliales activando vías de señalización, las cuales a su vez desencadenan la respuesta inmune y la activación de moléculas de adhesión que interactúan con los leucocitos circulantes y toda la maquinaria del sistema inmune. Estudios han demostrado que una de las principales moléculas de adhesión que inicia con la cascada de señalización para la respuesta inmune es P-selectina. Esta glicoproteína al recibir un estímulo, ya sea por LPS/ H2O2 gatilla un aumento en la translocación a la superficie de membrana. Sin embargo, no se conoce si al emplear inhibidores farmacológicos tanto a nivel de movimiento vesicular y síntesis proteica de P-selectina, esta sea capaz de llegar a superficie de membrana o si existe una vía/ruta alternativa que le permita ejercer su función. Es por ello que, el objetivos general de este proyecto radica en determinar la contribución del movimiento vesicular y de la expresión proteica de P selectina en el aumento de sus niveles en células endoteliales durante condiciones endotóxicas y estrés oxidativo. Para responder a este problema se llevó a cabo cultivo de células endoteliales no permeabilizadas, donde se empleó como metodología un pretratamiento con inhibidores farmacológicos, seguidos del estímulo de LPS/ H2O2, posteriormente se realizó una inmunofluorescencia y análisis estadístico dando como resultado que existe el aumento de P-selectina es dependiente del tráfico vesicular y de la síntesis proteica.
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    Participación de STAT3 en la fibrosis de células endoteliales vasculares
    (Universidad Andrés Bello, 2016) Rojas Gutiérrez, Macarena Alejandra; Simon Pino, Felipe; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    Un evento importante para el desarrollo de enfermedades cardiovasculares corresponde a la disfunción endotelial. Entre otras características, este evento comprende la transformación fibrótica del endotelio mediante un proceso denominado fibrosis endotelial. Durante este proceso, las células endoteliales cambian tanto su morfología como su patrón de expresión de proteínas a través de un mecanismo denominado transición endotelio-mesénquima. La fibrosis endotelial está caracterizada por la disminución de proteínas endoteliales (VE-CAD y CD-31), el aumento de proteínas fibróticas (FSP-1 y -SMA) y un incremento de componentes de la matriz extracelular (FN y Col III). Un inductor muy estudiado de fibrosis es el TGFβ-1, citoquina que estimula la producción de componentes fibróticos, contribuyendo a la generación de fibrosis. Por otro lado, existe evidencia que apunta a la participación del factor transcripcional STAT3 en el proceso de fibrosis celular. Nosotros observamos en nuestro laboratorio que la disminución de la expresión de STAT3 en células endoteliales produce un fenotipo tipo fibroblasto. Adicionalmente, observamos que la disminución de la expresión de STAT3 genera la síntesis y secreción de TGFβ-1, sugiriendo que esta citoquina y su vía de señalización intracelular podrían estar implicadas en el desarrollo de este fenotipo fibrótico. Así, nuestra hipótesis de trabajo es que la inhibición de la expresión de STAT3 induce fibrosis endotelial a través de un mecanismo mediado por la vía de señalización de TGFβ-1. En consecuencia, el objetivo general de este trabajo es evaluar si la inhibición de la expresión de STAT3 induce la fibrosis endotelial a través de un mecanismo mediado por la vía de señalización de TGFβ-1. Utilizando cultivos primarios de células endoteliales de mesenterio de rata y la transfección de un siRNA contra STAT3, concluimos que: 1) La inhibición de la expresión de STAT3 produce un cambio fenotípico tipo fibroblasto; 2) La inhibición de la expresión de STAT3 produce disminución de la expresión de marcadores endoteliales (VE-CAD y CD-31), además de un aumento de la expresión de marcadores fibróticos (FSP-1 y α-SMA) y de proteínas de la MEC (FN y Col III) así como la translocación de Smad4 desde el citoplasma al núcleo; 3) La inhibición del receptor de TGFβ-1, ALK-5, previene los efectos fibróticos producidos por la inhibición de la expresión de STAT3.