Examinando por Autor "Soza Ried, Jorge Eugenio"

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    Desarrollo de una elisa para la detección de anticuerpos IgM anti.ipnv en salmón
    (Universidad Andrés Bello, 2002) Soza Ried, Jorge Eugenio; Burzio, Luis; Facultad de Ecología y Recursos Naturales; Escuela de Ciencias del Mar
    Las pérdidas económicas generadas por el virus de la necrosis pancreática infecciosa (IPNV) han conllevado al desarrollo de técnicas para la rápida detección del patógeno y al control de la enfermedad mediante el uso de vacunas. En este contexto, se estudió el desarrollo de un ELISA que permitiría evaluar la respuesta inmune de los peces inmunizados. El primer objetivo fue caracterizar un panel de anticuerpos monoclonales anti-lgM de salmónidos, del cual se seleccionó el anticuerpo 3H7/E1 . Este anticuerpo fue exitosamente conjugado con peroxidasa , constituyendo uno de los componentes importantes en el desarrollo del ELISA. Además se determinó la concentración óptima de virus necesario para la activación de la placa, y la dilución del anticuerpo monoclonal anti-lgM conjugado a peroxidasa. Para la versión indirecta del ELISA, también se evaluó la dilución adecuada de un anti-lgG de ratón conjugado a peroxidasa. Para evaluar el ensayo se utilizó un panel de 49 sueros provenientes de peces vacunados con una virina del virus, y de 50 sueros de peces controles no vacunados. Al asumir un valor de corte ("cut-off') para el ensayo de ELISA de 0,3 0 .0 . a 450 nm, el grupo inmunizado presento un 89% de lecturas por sobre dicho valor, lo que sería equivalente a peces positivos. En el grupo control sólo un 44% de los sueros presentaba títulos de lgM altos contra el virus. Sin embargo, sueros que poseían altas lecturas de anticuerpos antiIPNV reaccionaron positivamente en placas activadas con Piscirickettsia sa/monis. Para determinar la especificidad de las lgM, estas fueron absorbidas con el virus, P. salmonis y otros patógenos de peces. Al absorber las lgM con los otros patógenos de peces se encontró que los títulos contra el virus o contra P. salmonis no fueron afectados. Sin embargo, los resultados de absorción con el virus o con P. salmonis indicaron que existe reacción cruzada de los sueros entre ambos patógenos, lo que sugiere que las lgM presentes en el suero son inespecíficas o reaccionan con epítopos de algunos antígenos que son comunes al virus y a P. salmonis.