Examinando por Autor "Talamilla Espinoza, Andrea"

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    Estudio del efecto del restablecimiento en cis del gen iraP en Salmonella Typhi STH2370 con respecto a la acumulación de RpoS y posibles fenotipos asociados
    (Universidad Andrés Bello, 2017) Talamilla Espinoza, Andrea; Fuentes Aravena, Juan; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    Salmonella Typhi (S. Typhi), agente causal de la fiebre tifoidea, infecta exclusivamente al ser humano. A pesar de que se encuentra estrechamente relacionada con Salmonella Typhimurium (S. Typhimurium), difieren en la especificidad de hospedero. Estas diferencias responden a un proceso evolutivo multifactorial que depende de la ganancia de funciones, la perdida de funciones y la regulación diferencial de los genes compartidos entre estos dos serovares. Un ejemplo de regulación diferencial es la ejercida sobre el factor sigma alternativo, RpoS, regulador maestro de la respuesta general a estrés, que contribuye en el ciclo infectivo de estos patógenos. Este factor está regulado a distintos niveles, siendo los mecanismos de proteólisis los más importantes. PhoPQ es un sistema de dos componentes que regula positivamente la acumulación de RpoS en S. Typhimurium. En estrés por bajas concentraciones de Mg2+, PhoP activa la transcripción del gen que codifica a IraP, proteína que impide que RpoS sea degradado por ClpXP. En nuestro laboratorio se ha observado que la acumulación de RpoS es diferente entre S. Typhimurium y S. Typhi, determinándose que la acumulación de RpoS en S. Typhi aumenta en mutantes ΔphoPQ. Como estudios previos se realizó un análisis bioinformático de S. Typhi y S. Typhimurium para intentar explicar estas diferencias y se encontró que nuestra cepa de trabajo S. Typhi STH2370 perdió un segmento genómico en la que estaba incluido el gen iraP. Por lo que nos preguntamos si la falta de iraP en S. Typhi es responsable de las diferencias en la acumulación de RpoS al compararse con S. Typhimurium. En la presente Tesis, se incorporó el gen iraP de S. Typhimurium en S. Typhi STH2370 en una única copia situada en su contexto genético original mediante una técnica de complementación heteróloga en cis y se evaluó su rol en la acumulación de RpoS en la cepa silvestre y en mutantes ΔphoPQ, utilizando fusiones lacZ, Western blot, ensayos de estabilidad de proteínas y ensayos de supervivencia a peróxido de hidrógeno. Además, se realizaron ensayos de invasión y proliferación en células epiteliales HT-29 para determinar si la ausencia de iraP corresponde a un caso de pérdida de función que tiene implicancia en la virulencia de S. Typhi. Encontramos que IraP incrementa la acumulación y la estabilidad de RpoS en condiciones de bajo Mg2+. Por otra parte, la presencia de IraP cambia la regulación de RpoS mediada por PhoPQ. Finalmente se observó que la cepa complementada con iraP presentó una disminución en la capacidad de invasión de células epiteliales HT-29 en comparación con la cepa silvestre. Los resultados obtenidos sugieren que la pérdida de iraP en S. Typhi podría implicar ciertas ventajas evolutivas.