Examinando por Autor "Zapata Rojas, Claudia Andrea"

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    Caracterización del gen yhjA y su contexto génico en la defensa durante estrés oxidativo frente a Fe3+ o H2O2 en Leptospirillum rubarum
    (Universidad Andrés Bello, 2013) Zapata Rojas, Claudia Andrea; Feijóo, Carmen Gloria; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    La biolixiviación es un proceso que permite la recuperación de metales desde minerales sulfurados gracias a la acción de microorganismos, los cuales juegan un rol indirecto regenerando el ion Fe3 + necesario para la solubilización de los metales. En este proceso, los miembros del género Leptospirillum son importantes debido a su capacidad para oxidar ión ferroso (Fe2+) a ión férrico (Fe3+). Los miembros de este género y otras bacterias biolixiviantes están usualmente expuestas a condiciones altamente oxidantes, causadas principalmente por altas concentraciones de hierro y otros metales, y pHs extremadamente bajos ( <1 ). Estas condiciones pueden favorecer la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS), como el peróxido de hidrógeno (H20 2), superóxido (02") y el radical hidroxilo (Olf), las cuales pueden inducir estrés oxidativo a los microorganismos. Adicionalmente, las bacterias oxidantes de hierro poseen elevadas tasas respiratorias que también pueden favorecer la generación de ROS. Todos estos factores pueden afectar la actividad y sobrevivencia de los microorganismos, no obstante, los mecanismos que ayudan a mantener la homeostasis redox de estas bacterias son muy poco conocidos. Con el objetivo de conocer los elementos moleculares involucrados en la respuesta antioxidante de Leptospirillum rubarum se realizó un análisis bioinformático, que reveló la presencia de genes codificantes para peroxidasas, enzimas que constituyen una barrera de protección frente a H20 2. El gen yhjA codifica para una citocromo e peroxidasa (CcP) y se localiza contiguamente a los genesfur y prx que codifican para un regulador de la homeostasis de hierro y una peroxirredoxina, respectivamente. Mediante RT -PCR se determinó que estos genes se ce-transcriben, incluyendo además al gen adr que codifica para una acireductona dioxigenasa, conformando así al denominado "operón ccp". Un análisis de RT-qPCR reveló que estos genes del operón incrementan levemente su expresión en células expuestas a estrés oxidativo por Fe3+ o H20 2 . Adicionalmente un análisis de actividad de la enzima CcP en extractos celulares de L. rubarum reveló que la enzima es funcional in vivo y que su actividad incrementa significativamente al inducir estrés oxidativo con Fe3+ o H20 2. Los resultados obtenidos sugieren que CcP constituye un elemento de respuesta frente a estrés oxidativo y que su actividad podría estar regulada a nivel transcripcional por Fe3+ o H20 2 intracelular.