Examinando por Autor "Aguayo Villegas, Daniel Rodrigo"

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    Estudio teórico-experimental de la contribución del oligosacárido central del Lipopolisacárido a la integridad de la membrana externa de Escherichia y Salmonella typhimurium
    (Universidad Andrés Bello, 2017) Alarcón Torres, Mackarenna Stefanie; Aguayo Villegas, Daniel Rodrigo; Facultad de Ciencias Biológicas.
    La capa de LPS de la ME de bacterias Gram negativo es afectada tanto por agentes liotrópicos como por factores termotrópicos que alteran su integridad y función. Por medio de Calorimetría Diferencial de Barrido (DSC) y simulación molecular, se estudió la contribución de los componentes del Oligosacárido central (OC) en la estabilidad e integridad de la ME y su relación con la resistencia a antibióticos. Para esto se caracterizó las temperaturas de transición de fase (Tm) de vesículas artificiales de LPS extraídos de las cepas AwaaF, AwaaQ, AwaaP y silvestre E. coli BW25113 y de S. typhimurium y sus mutantes OwaaL, Owaal, OwaaG. Los valores de Tm obtenidos y su relación con el quimiotipo de cada LPS indican que las modificaciones en el OC afectan tanto la Tm como el rango de transición de fase (RTm) de las vesículas, donde las cepas OwaaP, AwaaQ y silvestre de E. coli sufren los mayores cambios en su Tm y RTm. Mediante simulaciones de Dinámica Molecular se relacionaron los resultados obtenidos por DSC con la conformación adoptada a nivel atómico de bicapas formadas por LPS representativos de los quimiotipos OwaaP, AwaaQ y silvestre. En concordancia con los resultados de DSC, el análisis del parámetro de segundo orden de las cadenas aciles de cada LPS mostró cambios en la fase adoptada por estas bicapas, donde a 37 °C los LPS silvestre y AwaaQ se encontrarían en fase cristalina-liquida, mientras que el LPS OwaaP lo haría en fase lamelar. Además, el mayor valor de Tm del LPS OwaaP (47 °C) y la del LPS AwaaQ (23 °C) relacionan con la modificación de los ángulos de torsión de los enlaces glucosídicos del LPS, producto de los cambios conformacionales tanto a nivel de monómero como supramoleculares promovidos por la ausencia de residuos específicos a nivel del OC. Estos resultados permiten explicar el cambio en la permeabilidad de membrana frente a diferentes agentes, como también la susceptibilidad a distintos antibióticos, procesos a los que no solo contribuye el Lípido A, sino también son afectados por la composición del OC.
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    Rol de residuos cargados de las porinas OmpD y OmpW de salmonella entérica serovar typhimurium en la expulsión de metil viológeno por simulación y mutagénesis
    (Universidad Andrés Bello, 2008) Aguayo Villegas, Daniel Rodrigo; Saavedra Sánchez, Claudia; González Nilo, Danilo; Facultad de Ciencias de la Salud; Departamento de Ciencias Biológicas
    Las porinas, proteínas de membrana externa de bacterias Gram negativo, clásicamente se definen como canales acuosos que permiten la difusión pasiva de moléculas desde el espacio extracelular al periplasma. Recientemente fue reportado que las porinas OmpD y Omp W de Salmonella entérica serovar Typhimurium (STm) funcionan como canales de salida de moléculas tóxicas, en particular de la sal de amonio cuaternario metil viológeno (MV). La expulsión de tóxicos a través de estos canales, es un mecanismo nuevo y poco caracterizado de resistencia bacteriana. En este trabajo de investigación, se utilizó la simulación molecular para estudiar las propiedades que permiten que las porinas OmpD y Omp W participen de este mecanismo de resistencia. In silico, se determinó que la porina OmpD tiene una estructura terciaria y un potencial electrostático que beneficia la expulsión de MV. Al mutar in silico los residuos K16 y D 1 07, las propiedades del canal se ven alteradas, sugiriendo que la bacteria, al expresar estas porinas, presentara una disminución de la resistencia a MV. Por otra parte, la estructura predicha para la porina menor OmpW tiene un canal estrecho, con residuos cargados (R9, E54, D141) que facilitarían el paso de MV hacia el espacio extracelular. In silico, la mutación del residuo R9 altera la estructura del canal, desfavoreciendo el paso de MV. Estas predicciones in silico, son comprobadas al observar las diferencias fenotípicas en la resistencia a MV, de cepas de STm, que expresan las proteínas mutantes OmpD D107Q, OmpDK16Q y OmpWR9A; estableciéndose adem~s, que los residuos mutados tienen un rol en las propiedades de estas porinas que permiten la expulsión de MV, desde el periplasma al espacio extracelular.