Examinando por Autor "Defilippi Bruzzone, Bruno"
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Ítem Biosíntesis de ácido tartárico durante el desarrollo de uva de mesa (Vitis vinifera): Cv Thompson Seedless y Red Globe(Universidad Andrés Bello, 2012) Araneda Rodríguez, Cinthya Ester; González Agüero, Mauricio; Defilippi Bruzzone, Bruno; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaLa uva de mesa (Vitis vinifera) es el principal producto frutícola de exportación de nuestro país. El carácter organoléptico de la uva está directamente influenciado por las condiciones climatológicas, así como por el fondo genético propio de cada variedad, el cual se asocia especialmente a la relación de sólidos solubles/acidez. Entre los ácidos orgánicos de impo11ancia, encontramos el ácido tartárico, el cual sería un contribuyente relevante en el sabor y por consecuencia, variaciones en su concentración podría afectar la palatabilidad percibida por el consumidor. En este trabajo, se planteó la hipótesis que la síntesis de ácido tartárico estaría regulada diferencialmente por el gen que codifica para la enzima L-Idonato Deshidrogenasa en etapas tempranas de desarrollo para distintas variedades de vid . Con este propósito, se cuantificaron los ácidos orgánicos sintetizados y se analizó la expresión del gen de L-Idonato Deshidrogenasa (VvLJdnDH) durante el desarrollo de dos variedades comerciales de uva de mesa bajo distintas condiciones geográficas y tratamientos de etileno. Entre los huertos comerciales (Los Andes y Quinta de Tilcoco) y semi-comercial (Santiago) ubicados en las distintas regiones de estudio, se observaron diferencias tanto en el contenido de los ácidos como en la expresión de L-ldnDH. Se observó un aumento en el contenido de ácidos orgánicos, tanto tm1árico como málico, desde los primeros estadías hasta la etapa de pinta, para luego descender hasta un nivel basal. Estos resultados podrían estar indicando un posible efecto de la temperatura sobre algunos rasgos fisiológicos, como fue el tamaño de baya y así afectar la síntesis de ácido tartárico. Complementariamente, se determinó la posible participación de la hormona etileno durante el proceso de maduración de la uva de mesa. Se observó una menor acidez, como un menor contenido de ácidos orgánicos, en aquellas uvas tratadas con etileno exógeno comparado a aquellas tratadas con un inhibidor de su percepción (1-MCP) y plantas sin aplicación. A nivel génico, no se observaron diferencias significativas entre tratamientos durante todos los estadías de estudio. En conclusión, se podría establecer que factores medioambientales y rasgos propios de la uva de mesa, incluyendo la influencia de etileno en el proceso de maduración, estarían modificando la síntesis y el contenido de ácido tartárico.Ítem Estudio de la evolución de lípidos y compuestos volátiles durante la maduración en paltas var "Hass" de cosecha temprana y tardía(Universidad Andrés Bello, 2014) Busto Radafeldt, Amaya; González Agüero, Mauricio; Defilippi Bruzzone, Bruno; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaEl palto es uno de los principales cultivos de producción y exportación en Chile. El carácter organoléptico y la calidad del fruto son los principales factores que influyen en la aceptabilidad por parte del consumidor. Para la mantención de estos atributos, es de gran importancia que la recolección del fruto sea realizada en el momento óptimo, en donde el tiempo de cosecha es de gran importancia para la aceptación comercial del fruto. En este estudio, se realizó un seguimiento del proceso de maduración, tanto a nivel fisiológico como molecular, durante el cual se analizaron los cambios de color del fruto, firmeza, tasa respiratoria, niveles de etileno y análisis de expresión de los genes ACO y PG; estos factores fueron analizados en cosechas temprana (noviembre) y tardía (marzo), en condiciones control y con 1 -MCP. Para los parámetros evaluados, se encontró que existen diferencias entre cosechas, dado que la cosecha tardía demoró menos en llegar al climaterio y el aumento de expresión de PG fue mayor en el fruto maduro de la cosecha temprana; el 1-MCP aplicado a los frutos de cosecha tardía produjo un retraso del climaterio y una menor expresión de ACO y PG. Además, se estudió la evolución de los lípidos y los compuestos volátiles durante el proceso de maduración, usando las técnicas de GC-MS, SPME, GC y q-PCR. El ácido graso principal fue el ácido oléico (Aproximadamente 60% de ácidos grasos totales) y el contenido de ácido palmitoléico, linolénico y a-linolénico difiere entre cosechas. El análisis de expresión génica de BC, BCCP y SAD, enzimas primordiales para la biosíntesis de lípidos, no mostró diferencias durante el proceso. En los compuestos volátiles, el compuesto predominante en el aroma, hexanal, tiene una mayor concentración en la cosecha temprana. El análisis de expresión génica de los genes involucrados en la biosíntesis de volátiles mostró que LOX aumentó su expresión al final de la maduración en ambas cosechas, siendo este aumento mayor en la cosecha temprana, además este gen fue inhibido por 1 -MCP; AAT aumentó su expresión en el fruto maduro de la cosecha tardía, al igual que ADH2; sin embargo, esto no se observó en la cosecha temprana. Se pudo observar que la producción de compuestos volátiles provenientes de la ruta de la Lipoxigenasa varía durante la maduración del fruto y estaría modulada por etileno. Por otra parte, los cambios en el perfil de ácidos grasos no están relacionados con el evento de maduración en sí. Los resultados obtenidos sugieren importantes diferencias durante la maduración en ambas cosechas, tanto en el perfil de ácidos grasos como en la producción de compuestos volátiles.Ítem Participación de G-CSF en la migración de neutrófilos de pez cebra en respuesta a un daño(Universidad Andrés Bello, 2013) Galdames Paredes, Jorge Andrés; Feijóo García, Carmen Gloria; Defilippi Bruzzone, Bruno; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaLos neutrófilos son un tipo celular esencial para el desarrollo de una respuesta inflamatoria. La correcta regulación de la entrada de neutrófilos al sistema circulatorio es de gran importancia. Una neutropenia, o disminución permanente de los niveles sanguíneos de neutrófilos esta asociada a una mayor susceptibilidad a infecciones. Un aumento en los niveles sanguíneos puede llevar a infiltración de estos en los tejidos sanos, produciendo enfermedades inflamatorias. Se ha visto en mamíferos que el Factor Estimulador de Granulocitos, G-CSF, participa en la salida de los neutrófilos a la sangre, desde el sitio donde son retenidos, la médula ósea. G-CSF actúa disminuyendo los niveles de señales pro-retención, como CXCL12 con su receptor CXCR4, y aumentando la señalización pro-migración como son las citoquinas CXCL1, CXCL2 y CXCL8 con sus receptores CXCR1 y CXCR2. En pez cebra existen 2 parálogos para este gen, uno ubicado en el cromosoma 12 (gcsf-chr12), y otro ubicado en el cromosoma 19 (gcsf-chr19). Liongue et al. 2009 estudió gcsf-chr12 junto con su receptor y concluyeron que no participaba en la migración de neutrófilos en respuesta a un daño en la aleta ventral, pero que sí se observó un aumento en su expresión 8 horas después de ser desafiado con LPS. En este trabajo, estudiamos la participación de gcsf-chr 19 en la migración de neutrófilos en respuesta a un daño. Realizamos tres tipos distintos de daño: daño cercano, distante y severo. Y solo en el daño severo observamos la llegada de neutrófilos al daño por la circulación. Utilizamos este modelo de daño para analizar la expresión de gcsf-chr 19 y cxcl8, observamos un aumento de ambos 0.5 horas post daño (hpd) y un nivel máximo de expresión 1 hpd. Los niveles de gcsf-chr 19 disminuyeron a las 2 hpd y a las 3 hpd ya no se encontraron diferencias con los niveles basales. Los niveles de cxcl8 disminuyeron a las 2 hpd, pero a diferencia de g-csfchr 19 presenta un ligero aumento a las 3 hpd. Se diseñó un morfolino contra gcsf-chr 19 para analizar el efecto de la falta de función de este gen en la migración de neutrófilos. Se observó que en los controles sin inyectar, el porcentaje de neutrófilos en el sitio del daño aumentó considerablemente al comparar 1 y 3 hpd. En cambio, en los peces morfantes, el porcentaje de neutrófilos 3 hpd es similar a 1 hpd. Al inhibir la formación de peróxido de hidrógeno (señal pro-migratoria antes de 1 hpd) con el compuesto DPI se observa una disminución en el porcentaje de neutrófilos en el sitio del daño en embriones morfantes y controles a 1 hpd. En embriones controles este porcentaje aumenta a las 3 hpd, en cambio en morfantes se mantiene.