Examinando por Autor "Faunes, Fernando"

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    A role for Lin-28 in growth and metamorphosis in Drosophila melanogaster
    (Elsevier Ireland Ltd, 2018-12) González-Itier, Sergio; Contreras, Esteban G.; Larraín, Juan; Glavic, Álvaro; Faunes, Fernando
    Insect metamorphosis has been a classic model to understand the role of hormones in growth and timing of developmental transitions. In addition to hormones, transitions in some species are regulated by genetic programs, such as the heterochronic gene network discovered in C. elegans. However, the functional link between hormones and heterochronic genes is not clear. The heterochronic gene lin-28 is involved in the maintenance of stem cells, growth and developmental timing in vertebrates. In this work, we used gain-of-function and loss-of-function experiments to study the role of Lin-28 in larval growth and the timing of metamorphosis of Drosophila melanogaster. During the late third instar stage, Lin-28 is mainly expressed in neurons of the central nervous system and in the intestine. Loss-of-function lin-28 mutant larvae are smaller and the larval-to-pupal transition is accelerated. This faster transition correlates with increased levels of ecdysone direct target genes such as Broad-Complex (BR-C) and Ecdysone Receptor (EcR). Overexpression of Lin-28 does not affect the timing of pupariation but most animals are not able to eclose, suggesting defects in metamorphosis. Overexpression of human Lin-28 results in delayed pupariation and the death of animals during metamorphosis. Altogether, these results suggest that Lin-28 is involved in the control of growth during larval development and in the timing and progression of metamorphosis. © 2018 Elsevier B.V.
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    Análisis del mecanismo de muerte celular inducido por un nuevo derivado 1,4-naftoquinona sobre células de adenocarcinoma mamario triple negativo
    (Universidad Andrés Bello, 2022) Godoy Castilllo, Claudio Aurelio; Faunes, Fernando; Arriagada Inostroza, Gloria; Facultad de Ciencias de la Vida
    El cáncer es una de las principales causas de muerte en Chile y el mundo. En ambos contextos, el cáncer de mama es el que posee mayor incidencia y mortalidad en mujeres. Uno de los tipos de cáncer de mama más agresivos y de peor pronóstico clínico es el subtipo triple negativo. A pesar de los avances en medicina, actualmente no existe cura o tratamiento farmacológico efectivo que carezca de efectos adversos severos. Los compuestos químicos con estructura 1,4-naftoquinona exhiben múltiples propiedades farmacológicas, incluyendo actividad anticancerígena a través de más de un mecanismo de acción. En esta tesis se evaluó si un nuevo compuesto naftoquinónico (NFQ2Cl) es capaz de inducir apoptosis en la línea celular de adenocarcinoma mamario triple negativo MDA-MB-231. Se estudió el efecto de NFQ2Cl sobre la integridad de la membrana plasmática, la viabilidad celular, la morfología y la expresión de proteínas que participan en distintas formas de muerte celular. Los resultados indican que la incubación de 24 horas con NFQ2Cl disminuyó la viabilidad celular y alteró tanto la integridad de la membrana plasmática como la morfología de células MDA-MB-231. No se detectó inducción de apoptosis ni alteración en los niveles de la proteína ejecutora de necroptosis MLKL luego de la incubación con NFQ2Clpor 24 horas. Sin embargo, NFQ2Cl disminuyó los niveles de la proteína procaspasa-1y alteró los niveles de la proteína GSDMD, ambas involucradas en piroptosis. Por lo tanto, los resultados indican que el compuesto NFQ2Cl induce muerte celular por un mecanismo distinto a la apoptosis en la línea celular MDA-MB-231.
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    Bioinformatic analysis predicts that ethanol exposure during early development causes alternative splicing alterations of genes involved in RNA post-transcriptional regulation
    (Public Library of Science, 2023-04) Fuentes-Beals, Camilo; Olivares-Costa, Montserrat; Andrés, María Estela; Haeger, Paola A.; Riadi, Gonzalo; Oliva, Carlos; Faunes, Fernando
    Prenatal ethanol exposure is associated with neurodevelopmental defects and long-lasting cognitive deficits, which are grouped as fetal alcohol spectrum disorders (FASD). The molecular mechanisms underlying FASD are incompletely characterized. Alternative splicing, including the insertion of microexons (exons of less than 30 nucleotides in length), is highly prevalent in the nervous system. However, whether ethanol exposure can have acute or chronic deleterious effects in this process is poorly understood. In this work, we used the bioinformatic tools VAST-TOOLS, rMATS, MAJIQ, and MicroExonator to predict alternative splicing events affected by ethanol from available RNA sequencing data. Experimental protocols of ethanol exposure included human cortical tissue development, human embryobody differentiation, and mouse development. We found common genes with predicted differential alternative splicing using distinct bioinformatic tools in different experimental designs. Notably, Gene Ontology and KEGG analysis revealed that the alternative splicing of genes related to RNA processing and protein synthesis was commonly affected in the different ethanol exposure schemes. In addition, the inclusion of microexons was also affected by ethanol. This bioinformatic analysis provides a reliable list of candidate genes whose splicing is affected by ethanol during nervous system development. Furthermore, our results suggest that ethanol particularly modifies the alternative splicing of genes related to post-transcriptional regulation, which probably affects neuronal proteome complexity and brain function. © 2023 Fuentes-Beals et al.
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    Efecto de posibles inhibidores de la proteína de choque térmico 90 (HSP90) en la viabilidad de líneas celulares de adenocarcinoma mamario
    (Universidad Andrés Bello, 2020) Pérez Zamora, Bastián Francisco; Faunes, Fernando; Facultad de Ciencias de la Vida
    El cáncer de mama se encuentra en el primer lugar de incidencia y mortalidad en mujeres en Chile y el mundo. Dado que la cirugía no es suficiente en todos los casos, se requiere el uso de quimioterapia. En este contexto, es necesario buscar nuevos fármacos que no sean tóxicos para las células sanas y sean específicos para células tumorales. Uno de los blancos para lograr este objetivo es la familia de Proteínas de Choque Térmico 90 (HSP90). HSP90 es una proteína chaperona, sobreexpresada en muchos tipos de cáncer, incluido el de mama, encargándose de mantener el correcto plegamiento y funcionamiento de proteínas, permitiendo a células cancerígenas regular la apoptosis, carcinogénesis y resistencia a drogas anticancerígenas. Los inhibidores actuales de HSP90 no han aprobado todas las fases clínicas para su comercialización. Además, la utilización de este tipo de inhibidores provoca una respuesta compensatoria caracterizada por la inducción de otras proteínas de choque térmico, llamada Respuesta de Choque Térmico. Una de estas proteínas es HSP70, que aumenta sus niveles luego de la inhibición de HSP90. En este contexto, es necesario el diseño y evaluación de inhibidores de HSP90 que no presenten estos problemas. El objetivo de esta investigación fue evaluar el efecto de tres nuevos posibles inhibidores de HSP90 in vitro, mediante la realización de ensayos de viabilidad en las líneas de adenocarcinoma mamarios, MCF-7 y MDA-MB-231, la línea no cancerígena de mama, MCF-10F, y una línea de riñón embrionario humano HEK 293A. Además, se estudió el efecto en los niveles de expresión de HSP70 y proteínas relacionadas a la función de HSP90 como Cdk4 y la forma fosforilada de ERK mediante western blots en la línea MDA-MB-231 tras la incubación con uno de los nuevos posibles inhibidores de HSP90. Los resultados obtenidos en los ensayos de viabilidad mostraron que las 3 moléculas son citotóxicas en las líneas celulares MCF-7, MDA-MB-231 y HEK 293A, y sugieren que no lo son en la línea celular MCF-10F. La disminución de expresión de Cdk4 y la expresión constante de p-ERK y HSP70 tras la incubación con uno de los posibles inhibidores de HSP90 en la línea MDA-MB-231, sugieren que no ocurre Respuesta de Choque Térmico. Sin embargo, se necesitan futuros estudios para determinar si estos inhibidores actúan sobre HSP90 u otros blancos celulares. Toda esta información servirá a futuro para mejorar el diseño y síntesis de nuevos compuestos anticancerígenos.
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    Efectos de derivados de naftoquinonas en la viabilidad de células de adenocarcinoma mamario y de embriones de xenopus laevis
    (Universidad Andrés Bello, 2020) Espinoza González, Sofía; Faunes, Fernando; Facultad de Ciencias de la Vida.
    El cáncer es una de las principales causas de muerte a nivel mundial, siendo en mujeres el cáncer de mama la principal causa de muerte en Chile. Estudios en varios tipos de cáncer indican que la proteína de choque térmico 90 (HSP90) es un marcador molecular de cáncer. HSP90 es una proteína chaperona con actividad ATPasa que participa en el plegamiento de proteínas. Proteínas dependientes de HSP90 participan en diversas vías de señalización oncogénicas. HSP90 se encuentra sobreexpresado en cáncer, convirtiéndose en uno de los principales objetivos para las quimioterapias. Derivados de naftoquinonas se postulan como posibles inhibidores de HSP90 y se ha demostrado que poseen actividad anticancerígena. Como parte de una colaboración con el Departamento de Ciencias Químicas, nuevos derivados de naftoquinonas fueron desarrollados con posible actividad antitumoral. En esta memoria, se estudió el efecto de 3 nuevos derivados de naftoquinona en la viabilidad de células in vitro e in vivo. Líneas celulares de cáncer de mama MCF-7 y MDA-MB-231 fueron utilizadas para analizar el efecto de los derivados naftoquinónicos mediante ensayo de viabilidad MTS. Como control se utilizó la línea MCF-10F, una línea no cancerígena de epitelio mamario. Además, se analizó el efecto en líneas de origen embrionario HEK293A como otro modelo de comparación. Se analizó si ocurría muerte celular por apoptosis con análisis de expresión por inmunoblot de caspasa-3. Finalmente, se realizaron ensayos in vivo incubando embriones tempranos de Xenopus laevis en presencia de los derivados. Dos de los tres nuevos derivados fueron citotóxicos en ensayos in vitro e in vivo y fueron menos efectivos en la línea control no cancerígena MCF-10F. El derivado más citotóxico causó muerte celular pero no se detectó activación de la caspasa-3. Con este trabajo se busca contribuir al desarrollo racional de drogas con potencial actividad antitumoral, aportando información que permita comprender sus mecanismos de acción y optimizar su diseño y especificidad ante determinados marcadores moleculares.
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    Overexpression of Lin28a delays Xenopus metamorphosis and down-regulates albumin independently of its translational regulation domain
    (John Wiley and Sons Inc., 2019-10-01) Gundermann, Daniel G.; Martínez, Jimena; De Kervor, Genevieve; González-Pinto, Karina; Larraín, Juan; Faunes, Fernando
    Background: Lin28 regulates stem cell biology and developmental timing. At the molecular level Lin28 inhibits the biogenesis of the micro RNA let-7 and directly controls the transcription and translation of several genes. In Xenopus, Lin28 overexpression delays metamorphosis and affects the expression of genes of the thyroid hormone (TH) axis. The TH carrier albumin, synthesized by the liver, is down-regulated in limbs and tail after Lin28 overexpression. The molecular mechanisms underlying the interaction between Lin28, let-7, and the hypothalamus–pituitary–thyroid gland (HPT) axis are unknown. Results: We found that precursor and mature forms of let-7 increase during Xenopus metamorphosis. In the liver, lin28b is down-regulated and albumin is up-regulated during metamorphosis. Overexpression of a truncated form of Lin28a (Lin28aΔC), which has been shown not to interact with RNA helicase A to regulate translation, delays metamorphosis, indicating that the translational regulation domain is not required to inhibit the HPT axis. Importantly, both full length Lin28a and Lin28aΔC block the increase of albumin mRNA in the liver independently of changes in TH signaling. Conclusions: These results suggest that Lin28 delays metamorphosis through regulation of let-7 and that the decrease of the TH carrier albumin is one of the early changes after Lin28 overexpression.
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    The heterochronic gene Lin28 regulates amphibian metamorphosis through disturbance of thyroid hormone function
    (Academic Press Inc., 2017-06) Faunes, Fernando; Gundermann, Daniel G.; Muñoz, Rosana; Bruno, Renzo; Larraín, Juan
    Metamorphosis is a classic example of developmental transition, which involves important morphological and physiological changes that prepare the organism for the adult life. It has been very well established that amphibian metamorphosis is mainly controlled by Thyroid Hormone (TH). Here, we show that the heterochronic gene Lin28 is downregulated during Xenopus laevis metamorphosis. Lin28 overexpression before activation of TH signaling delays metamorphosis and inhibits the expression of TH target genes. The delay in metamorphosis is rescued by incubation with exogenous TH, indicating that Lin28 works upstream or parallel to TH. High-throughput analyses performed before any delay on metamorphosis or change in TH signaling showed that overexpression of Lin28 reduces transcript levels of several hormones secreted by the pituitary, including the Thyroid-Stimulating Hormone (TSH), and regulates the expression of proteins involved in TH transport, metabolism and signaling, showing that Lin28 disrupts TH function at different levels. Our data demonstrates that the role of Lin28 in controlling developmental transitions is evolutionary conserved and establishes a functional interaction between Lin28 and thyroid hormone function introducing a new regulatory step in perinatal development with implications for our understanding of endocrine disorders. © 2017 The Authors