Examinando por Autor "Miyasaka de Almeida, Andrea"
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Ítem Desarrollo de nano vehículos de baja toxicidad para el transporte para aplicación exógena de ARN doble hebra (ARNdh) en plantas(Universidad Andrés Bello, 2023) Salinas Jiménez, Rafael Alberto; Miyasaka de Almeida, Andrea; Ahumada Escandón, Manuel; Moreno Vilches, Adrián AndrésLa búsqueda de cómo aplicar los ARNdh es un foco de gran interés para el desarrollo agrícola hoy en dia, por lo cual se han evaluado mecanismos de transgénesis y aplicaciones exógenas. La transgénesis se ve como limitante debido a las regulaciones legales que existen para ella. Las aplicaciones exógenas tienen ciertas dificultades relacionadas a las barreras que se deben sobrepasar para poder realizar el proceso de modulación genética. Se ha reportado el uso de diversas moléculas como vehículo estable para los ARNdh, entre ellas dos nanopartículas: los puntos cuánticos de carbono (PCC) y las nano láminas de arcilla (NA) que han mostrado tener las características necesarias para poder cargar una molécula de ARN, como es la carga positiva. Igualmente se ha probado su capacidad para realizar modulaciones genéticas mostrando resultados exitosos. Ante esto se plantea que ARNdh puede ser aplicados de forma exógena en tejidos vegetales ocupando nanopartículas cómo vehículos, por lo cual se tiene el objetivo de desarrollar un sistema de entrega de ARNdh exógeno en tejidos vegetales. Para esto se sintetizaron los PCC y el NA, caracterizándolos mediante UV-Visible, TGA, FT-IR, SEM y TEM, permitiendo así conocer su estructura, características ópticas y tamaño. Una vez que ya se caracterizaron se realizaron pruebas de proporción de carga y resistencia a distintas condiciones de las nanopartículas. Finalmente, se realizó un ensayo de toxicidad para evaluar la fitotoxicidad que pudieran presentar las nanopartículas a los tejidos vegetales. Obteniendo así PCC de tamaños de ~1,5 nm con carga positiva, notando 3 picos de fluorescencia. Se logró conocer su proporción de carga mínima, además mostrando que el sistema ARNdh:PCC se mantiene estables a altas temperaturas y a distintas concentraciones de Rnasas. Para el caso de las NA se obtuvo un tamaño de ~15 nm con carga positiva, notando que las NA no lograban proteger al ARNdh de las Rnasas, pero el sistema si se mantiene estable a altas temperaturas. Esta nanopartícula mostró no ser toxica para tejidos vegetales. Por lo cual, se podría considerar a NA un vehículo estable y de baja toxicidad para ARNdh, de igual forma PCC se muestra como un vehículo estable, pero aun se encuentra en duda su toxicidad, requiriendo así ensayos posteriores que ayuden a entender su toxicidad.Ítem Efecto de la manipulación del equilibrio fuente-sumidero en el perfil de metabolitos asociados a calidad en frutos de Prunus persica (L.) Batsch Var "Buen lindo"(Universidad Andrés Bello, 2017) Lillo Carmona, María Victoria; Miyasaka de Almeida, Andrea; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaPrunus persica (L.) Batsch, durazno y nectarinas, pertenece a la familia Rosaceae y es originario de China. Es uno de los frutos más populares que se cultivan en zonas templadas alrededor del mundo. Chile es su principal exportador del hemisferio sur en contra-estación y Es necesario el incremento de la calidad de los frutos, atribuibles al tamaño, color, firmeza, frescura, aroma, dulzor, acidez, jugosidad y textura para que el país se mantenga en esa posición de liderazgo en el mercado. Metabolitos tales como azúcares, ácidos orgánicos y aminoácidos entre otros, los cuales van cambiando dependiendo de la variedad y el estado del desarrollo en el cual se encuentre el fruto, están directamente relacionados a algunos de esos parámetros de calidad. Una manera de modificar el metabolismo es cambiando el equilibrio fuente-sumidero del árbol, utilizando técnicas como el raleo. En este trabajo se evaluó el perfil metabolómico de frutos de la variedad temprana de durazno `Buen Lindo´ de árboles sometidos a dos tratamientos: con raleo y sin raleo. Para ello, se realizó una extracción de metabolitos de frutos en distintos estados de desarrollo y se analizaron mediante cromatografía de gases acoplado a un detector de masas. Los datos se analizaron mediante análisis de regresión de mínimos cuadrados parciales con análisis discriminante (PLS-DA), evaluando los principales metabolitos asociados a cada estado de desarrollo del fruto, y además relacionándolos a un tratamiento de raleo. Se identificaron los principales metabolitos involucrados en la calidad final del fruto siendo la mayor parte azúcares y ácidos orgánicos. El efecto del raleo se observó a nivel fenotípico, incidiendo en la producción de frutos de mayor tamaño y con mayor cantidad de sólidos solubles. Además, el raleo modificó el perfil metabólico, encontrándose mayor cantidad relativa de azúcares y ácidos orgánicos en el tratamiento sin raleo en madurez de consumo.Ítem Efecto del raleo en la producción y transporte de azúcares de translocación en Prunus persica (L.) Batsch(Universidad Andrés Bello, 2017) Núñez Marín, Carlos Alejandro; Miyasaka de Almeida, Andrea; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaChile es el principal exportador de duraznos y nectarines hacia el hemisferio norte en período de contra-estación. Los mercados internacionales están sujetos a ciertos estándares de calidad de la fruta, donde la mayoría busca frutos de mayor tamaño y dulzor. Estas dos características pueden verse afectadas por la técnica agronómica conocida como raleo, la cual tiene como fin favorecer a que los frutos alcancen su máximo potencial. Sin embargo, no todas las variedades de durazno responden de la misma forma al raleo, es por esto que nosotros proponemos que el raleo en Prunus persica lleva a un aumento del tamaño y contenido de azúcar del fruto debido a una mayor expresión de los transportadores de sacarosa y sorbitol en los órganos fuente y órganos sumideros. El objetivo de este trabajo fue comparar y cuantificar la actividad fotosintética, morfología, contenido de azúcares y expresión génica de los transportadores de sacarosa y sorbitol en hojas y frutos de árboles de Prunus persica sometidos a diferentes niveles de raleo durante una temporada. Los tratamientos utilizados en esta investigación fueron raleo comercial (19 hojas/fruto), sin raleo (2 hojas/fruto) y raleo total (sin frutos). Los frutos de los árboles con raleo comercial presentaron mayor tamaño y una alta cantidad de sólidos solubles comparado con frutos del tratamiento sin raleo. El raleo también adelantó el desarrollo de los frutos de ‘Buen Lindo’. Los árboles de los tratamientos sin raleo mostraron una mayor tasa fotosintética que aquellos que poseen raleo. Por otro lado, la concentración de sorbitol presente en hojas fue significativamente menor en S2, en el tratamiento sin raleo. En cambio, en fruto se observa una diferencia significativa en la acumulación de sacarosa en el tratamiento de raleo comercial con respecto al tratamiento sin raleo hacia el período de cosecha (S3). La morfología de hoja, peciolo y pedicelo no presentó diferencias significativas en el floema para ninguno de los tratamientos de raleo en los estados S1, S2 y S3. Por otro lado, el peciolo de las hojas de los árboles con el tratamiento de raleo comercial presentó sistema vascular más desarrollado en comparación al tratamiento sin raleo. Tampoco se observan diferencias en el tamaño celular y número de células de los frutos entre los tratamientos de raleo comercial y sin raleo. Finalmente, la expresión relativa de los transportadores SUT1 y Poliol 4 en frutos muestra un aumento en el tratamiento de raleo comercial en los estados S1 y S3. La expresión relativa de los transportadores SUT1, SUT4, Poliol 4 y Poliol 5 en hojas no muestra diferencias significativas para ninguno de los tratamientos de raleo. En conclusión, 11 el raleo afecta el tamaño y acumulación de azúcares en el fruto probablemente debido a una mayor expresión de transportadores de azúcares en el fruto y también genera un cambio en la morfología del sistema vascular de las hojas.Ítem Efectos del raleo sobre los perfiles de azúcares y ácidos orgánicos en Prunus Persica [(L.) Batsch] durante postcosecha(Universidad Andrés Bello, 2017) Melet Alarcón, Lorena Isabel; Miyasaka de Almeida, Andrea; Valenzuela, María Luisa; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaChile es el principal exportador de nectarines hacia el hemisferio norte en contra-estación. Dado que los mercados se encuentran en el extranjero la fruta es transportada a 0 °C por alrededor de un mes. En estas condiciones, algunos frutos presentan desórdenes postcosecha después de prolongados tiempos expuestos al frío evidenciando principalmente harinosidad y pardeamiento de la pulpa. Nosotros creemos que el manejo agronómico tal como el raleo podría afectar el tamaño final, la composición de los metabolitos en la pulpa y alterar la tolerancia/susceptibilidad del fruto cuando es expuesto al frío. El objetivo de este trabajo fue analizar los efectos del tratamiento de raleo en los perfiles de metabolitos y daño postcosecha de los frutos en cosecha y almacenamiento en frío en las variedades de nectarines ‘Magique’ y ‘Red Pearl’. Los tratamientos fueron raleo comercial (34 hojas/fruto) y control sin raleo (10 hojas/fruto). Los frutos fueron cosechados con una firmeza similar (53,4 N) y mantenidos a 0 °C por 21 días y 0 °C por 21 días más 5 días a 20 °C. Los frutos de árboles con raleo de ambas variedades presentaron mayor tamaño y un nivel de sólidos solubles más alto comparado con frutos control de árboles sin raleo. El raleo también adelantó el desarrollo de los frutos de ‘Red Pearl’. El contenido de azúcares y ácidos orgánicos fue analizado por HPAEC-PAD y HPLC-DAD respectivamente. ‘Red Pearl’ presentó variación significativa en la concentración de metabolitos debido al raleo, principalmente en los azúcares y ácidos orgánicos. ‘Magique’ no fue afectado por el raleo en estos parámetros, sugiriendo que los cambios metabólicos en la pulpa de los frutos inducido por el raleo es variedad dependiente. La variedad ‘Red Pearl’ presentó enrojecimiento de la pulpa tanto en frutos de árboles con raleo como en los controles sin raleo expuestos al frío. Los frutos de la variedad ‘Magique’ de árboles sin raleo presentaron falta de jugosidad (harinosidad) cuando fueron expuestos al frío y los frutos de árboles con raleo fueron jugosos. En este parámetro el raleo ayuda a la prevención de daños postcosecha en la variedad ‘Magique’. En conclusión, el efecto del raleo sobre los metabolitos presentes en la pulpa de los frutos, y sobre la resistencia/susceptibilidad al daño por frío, depende de la variedad y la temporada en la cual se lleve a cabo.Ítem Identificación y caracterización de genes claves en el control de la dormancia en cerezo(Universidad Andrés Bello, 2013) González Vega, José Pablo; Miyasaka de Almeida, Andrea; Prieto, Humberto; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaLos árboles perennes como el cerezo, presentan un cese del crecimiento durante el invierno. En esta estación las yemas, tanto florales como vegetativas, dejan de crecer y entran en un estado de latencia llamado dormancia. La dormancia es definida como la inhabilidad de reanudar el crecimiento de un meristema, bajo condiciones favorables. Para salir de este estado, se necesita que el árbol pase por un periodo prolongado de frío que se denomina requerimiento de frío. Poco se sabe de la regulación molecular de este proceso y existe aún menos información en el cerezo (Prunus avium). Se sabe que la expresión de los genes DORMANCY ASSOCIA TED MADS-BOX (DAM) debe ser reprimida para que ocurra la salida de la dormancia. Las plantas anuales como Arabidopsis, pasan por un proceso llamado vernalización; éste también requiere un periodo de frío para que ocurra la transición del meristema vegetativo a reproductivo, donde actúa un gen ortólogo a los genes DAM, llamado FLOWERING LOCUS C (FLC) donde su expresión es reprimida epigeneticamente por un periodo largo de frio. Debido a la similitud entre el proceso vernalización en Arabidopsis, y el requerimiento en frío en árboles perennes, se buscaron putativos ortólogos de genes involucrados en el proceso de vernalización en el genoma de Prunus persica (duraznero). Se identificaron cinco posibles ortólogos de los genes VERNALIZA TION 5N/N3-LIKE1 (VRN5NIL1) , VERNALIZATION 2, (VRN2) , VIN3-LIKE 1 (VIL2/VEL1), VERNALIZATION 1 (VRN1) y FLOWERING LOCUS T (FT) . VIL1 , VEL1 y VRN2, que forman parte del complejo POL YCOMB REPRESSIVE COMPLEX 2 (PRC2), involucrado en la represión epigenética del gen FLC. VRN1 es el encargado de mantener el estado de metilación en el tiempo y FT es un integrador y promotor floral. En este trabajo se evaluó la expresión de esos genes putativos y de los genes DAM en yemas florales de la variedad Bing a lo largo de la temporada 2012. Se observó que los genes VIL1, VEL1, VRN1, VRN2 y FT, mantuvieron una baja expresión hasta el 31 de agosto, al alcanzar aproximadamente 1300 unidades frío, donde mostraron un pico de expresión. DAM3 no presentó cambios significativo en las fechas estudiadas. Este estudio ha identificado por primera vez genes que tienen una expresión diferencial en yemas florales de cerezo y que podrían estar regulando el proceso de dormancia.