Examinando por Autor "Mora Longa, Guido"
Mostrando 1 - 5 de 5
Resultados por página
Opciones de ordenación
Ítem Aislamiento y caracterización de un bacteriófago específico para aggregatibacter actinomycetemcomitans, agente etiológico de la periodontitis agresiva(Universidad Andrés Bello, 2008) Delgado Pérez, José Manuel; Mora Longa, Guido; Rosenberg Soulodre, Carol; Hernández Santander, Verónica; Facultad de MedicinaEl término enfermedad periodontal se refiere a un conjunto de enfermedades inflamatorias que afectan los tejidos de soporte del diente, esta patología resulta de un desequilibrio entre la interacción inmunológica del hospedero y la flora de la placa dental. Las manifestaciones clínicas de esta enfermedad se agrupan bajo el nombre de gingivitis y periodontitis. Entre las bacterias relacionadas con la instauración de esta patología, la especie Aggregatibacter actinomycetemcomitans se ha asociado especialmente con el desarrollo de la periodontitis agresiva, forma de infección que se presenta con una frecuencia considerable en individuos jóvenes. La aparición cada vez más frecuente de bacterias resistentes al tratamiento con antibióticos ha hecho que, se piense de nuevo en los bacteriófagos como una alternativa terapéutica al empleo de los antimicrobianos actuales. Los fagos corresponden a pequeñas partículas virales capaces de destruir específicamente bacterias. Existen numerosos estudios que apoyan la eficacia de esta terapia y por ende sugieren que la fagoterapia es una alternativa a considerar. Además, por muchos años, los bacteriófagos han servido como poderosas herramientas genéticas para el estudio de mecanismos de patogenicidad bacteriana. En el presente proyecto se aislaron, a partir de pacientes diagnosticados de enfermedad periodontal y personas sanas, siete cepas de Aggregatibacter actinomycetemcomitas las que fueron utilizadas para la búsqueda y aislamiento del nuevo bacteriófago Aabq>O 1. El análisis de las curvas de crecimiento en medios suplementados sugiere que los viriones aislados son capaces de infectar las cepas susceptibles prescindiendo de la presencia de calcio y magnesio en el medio. Las características de la curva de infección y las placas de lisis indican que se trata de un fago lisogénico. Se logró la extracción del material genético viral y su digestión con enzimas de restricción lo que demostró que se trata de DNA cuyo tamaño molecular aproximado es de 24,3 Kpb. Este parámetro fue estimado por comparación de las migraciones electroforéticas de la digestión con la endonucleasa Bgl II y el estándar de peso molecular de 1 Kb.Ítem Aislamiento y caracterización de un bacteriófago específico para aggregatibacter actinomycetemcomitans, agente etiológico de la periodontitis agresiva.(Universidad Andrés Bello, 2008) Delgado Pérez, José Manuel; Mora Longa, Guido; Facultad de Medicina; Facultad de Ciencias de la Salud; Escuela de Química y FarmaciaEl término enfermedad periodontal se refiere a un conjunto de enfermedades inflamatorias que afectan los tejidos de soporte del diente, esta patología resulta de un desequilibrio entre la interacción inmunológica del hospedero y la flora de la placa dental. Las manifestaciones clínicas de esta enfermedad se agrupan bajo el nombre de gingivitis y periodontitis. Entre las bacterias relacionadas con la instauración de esta patología, la espeCIe Aggregatibacter actinomycetemcomitans se ha asociado especialmente con el desarrollo de la periodontitis agresiva, forma de infección que se presenta con una frecuencia considerable en individuos jóvenes. La aparición cada vez más frecuente de bacterias resistentes al tratamiento con antibióticos ha hecho que, se piense de nuevo en los bacteriófagos como una alternativa terapéutica al empleo de los antimicrobianos actuales. Los fagos corresponden a pequeñas partículas virales capaces de destruir específicamente bacterias. Existen numerosos estudios que apoyan la eficacia de esta terapia y por ende sugieren que la fagoterapia es una alternativa a considerar. Además, por muchos años, los bacteriófagos han servido como poderosas herramientas genéticas para el estudio de mecanismos de patogenicidad bacteriana. En el presente proyecto se aislaron, a partir de pacientes diagnosticados de enfermedad periodontal y personas sanas, siete cepas de Aggregatibacter actinomycetemcomitas las que fueron utilizadas para la búsqueda y aislamiento del nuevo bacteriófago Aabü l. El análisis de las curvas de crecimiento en medios suplementados sugiere que los viriones aislados son capaces de infectar las cepas susceptibles prescindiendo de la presencia de calcio y magnesio en el medio. Las características de la curva de infección y las placas de lisis indican que se trata de un fago lisogénico. Se logró la extracción del material genético viral y su digestión con enzimas de restricción 10 que demostró que se trata de DNA cuyo tamaño molecular aproximado es de 24,3 Kpb. Este parámetro fue estimado por comparación de las migraciones e1ectroforéticas de la digestión con la endonucleasa Bgl TI y el estándar de peso molecular de 1 Kb.Ítem Caracterización de la regulación de la expresión de hlyE y STY1499 en salmonella enterica serovar Typhi(Universidad Andrés Bello, 2008) Jofré Bartholin, Matías Roberto; Mora Longa, Guido; Facultad de Ciencias de la Salud; Departamento de Ciencias BiológicasA través de la evolución Salmonella enterica se ha adaptado a hospederos únicos en los cuales pueda completar su ciclo infectivo con éxito. Algunos de los genes que codifican los productos necesarios de la bacteria para el proceso de infección del hospedero se encuentran codificados en islas de patogenicidad de Salmonella (SPI's), las cuales están presentes en cepas patógenas pero se encuentran ausentes en cepas inocuas. La SPI-18 de Salmonella enterica serovar Typhi posee dos marcos de lectura, hlyE y STY1499. El primero codifica para la hemolisina HlyE, factor de virulencia en la bacteria, y del segundo no se conoce aún su producto ni una función asociada. La SPI- 18 está presente exclusivamente en Salmonella Typhi y Paratyph.i A, serovares restringidos sólo al ser humano y ha sido caracterizada sólo en cuanto al rol que posee la hemolisina HlyE en patogenicidad. Asimismo se desconoce de qué manera y bajo que estímulos son regulados los genes de la SPI -18 en la bactetia. En esta tesis se caractetizó la regulación de la expresión de hlyE y STY1499 para a detem1inar cuales condiciones ambientales asociadas a la virulencia aumentan la expresión de estos genes. Empleando fusiones transcripcionales, RT-PCR e hibridaciones Western se estudió la expresión de ambos genes y se detem1inó que la acidez, la alta osmolaridad y la baja disponibilidad de Mg2 + en el medio de cultivo son condiciones inductoras de la expresión de hlyE y STY1499. Así mismo, se estableció que ambos marcos de lectura se co-transctiben en condiciones estándar de crecimiento y su expresión es coordinada en condiciones de estrés ácido y alta osmolaridad, como también diferencial a bajas concentraciones de Mg2 +. De esta fom1a se detenninó que la SPI-18 cmresponde a un nuevo operón y que las proteínas sintetizadas por hlyE y STY1499 en esta isla podrian estar participando activamente y de fom1a distinta durante la intemación de la bacteria en el lumen intestinal y a la diseminación de ésta en células fagocíticas.Ítem Caracterización del operón de fimbria stg de salmonella enterica serovar typhi: estudios de expresión y participación en la adherencia a células humanas(Universidad Andrés Bello, 2012) Berrocal Silva, Liliana; Mora Longa, Guido; Bittner Ortega, Mauricio; Facultad de Ciencias BiológicasSalmonella enterica serovar Typhi es el agente causal de la fiebre tifoidea exclusivamente en el ser humano y tiene doce operones de fimbria de la familia chaperona-usher en su genoma, entre ellos stgABCD que no existe en S. Typhimurium, serovar que produce fiebre tifoidea en el ratón. En este trabajo se caracterizó el operón stg y se determinó su participación en la patogenicidad de S. Typhi. La cepa clínica S. Typhi STH23 70 y las cepas secuenciadas Ty2 y CT18 tienen un codón de término prematuro en el marco de lectura stgC, que codifica para la proteína usher, de manera que está descrito como un pseudogen. Cuando el operón stgABCD se delecionó desde S. Typhi STH2370, se observó una disminución de la adherencia e invasión a células fagocíticas humanas. Por el contrario, cuando el operón stg fue clonado en el vector de mediano número de copias pSU19 y transformado en S. Typhimurium 14028s aumentó la adherencia e invasión a células mononucleares de sangre periférica. En ensayos de migración transepitelial realizados en células HT -29 polarizadas, la expresión heteróloga del operón stgABCD en S. Typhimurium 14028s modificó su comportamiento habitual de migración, observándose un fenotipo similar al de la cepa silvestre S. Typhi STH2370, que altera más notoriamente la permeabilidad celular. Para estudiar la expresión del operón stg, se hizo una fusión traduccional con el epítopo 3XFlag en el gen stgD, que codifica para la adhesina de la fimbria. El operón marcado de esta forma se clonó sin su promotor endógeno en el vector pGem-TEasy. Luego, a través de un ensayo de Western blot se observó que la proteína StgD se sintetizó cuando el operón está sobreexpresado tanto en la cepa mutante como en la cepa heteróloga. Por inmunomicroscopía electrónica en estas mismas cepas, se comprobó la presencia de esta proteína en la superficie bacteriana. Esto sugiere que el operón stg de S Typhi da origen a una fimbria capaz de ensamblarse en la superficie bacteriana, usando probablemente su propio usher descrito como pseudogen o un usher alternativo que pueda funcionar en esta vía. Los resultados también sugieren que esta fimbria contribuye en la adherencia a células fagocíticas humanas, ayudando en la interacción patógeno-hospedero durante el cuadro de fiebre tifoidea.Ítem La pseudogenización del regulador transcripcional MarT, contribuye a la patogenicidad de Salmonella Typhi(Universidad Andrés Bello, 2017) Jerez Navarrete, Sebastián Andrés; Mora Longa, Guido; Villagra Marín, Nicolás; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaSalmonella enterica serovar Typhimurium (STM) es considerado un patógeno generalista ya que infecta aves, ratones y humanos. Por otro lado, Salmonella enterica serovar Typhi (STY) es considerado un patógeno de hospedero restringido que sólo infecta al ser humano. A pesar de estas diferencias STM y STY comparten un 97% de identidad entre los genes que comparten. La transferencia horizontal y la pérdida de material genético han sido esenciales para la diferenciación de ambos serovares. La isla SPI-3 es un ejemplo del resultado de estos dos procesos. SPI-3 codifica – entre otros genes - para misL y marT. En STM, misL es requerido para la colonización instestinal de aves y ratones infectados oralmente. Además, se ha reportado que MarT regula positivamente a misL en STM, de manera directa mediante el reconocimiento de la secuencia consenso TNAAANNNNNTNAAA en su promotor. Por otra parte, en STY existen genes de SPI-3 que se encuentran como pseudogenes (marT es uno de ellos); mientras que otro marco de lectura, como es el caso de surV (que está involucrado en la resistencia a H2O2) está presente sólo en STY. Es interesante que la expresión heteróloga de marTSTM en STY regula negativamente a surV, a nivel transcripcional. Además, análisis transcriptómicos de STM al interior de macrófagos muestran que la expresión de marT incrementa 10 veces, reforzando la idea de que este gen está involucrado en la virulencia de STM. Por estas razones, el objetivo de este trabajo es encontrar y caracterizar nuevos genes regulados por MarT. Con este propósito, se realizó una búsqueda global in silico de la secuencia TNAAANNNNNTNAAA para identificar posibles blanco de MarT. Una vez seleccionados y validados esos genes, se confirmó que MarT está involucrado en una regulación negativa de STY1408, un gen con 98% de identidad a quimiorreceptores de la familia MCPs. Ensayos en placas de agar semisólido muestran que STY1408 está involucrado en motilidad tanto en STM como en STY. Infecciones de células HEp-2 con STM y STY mutantes en el gen STY1408 muestran un defecto en invasión, mientras que infecciones orales en ratón con mutantes nulas de STY1408 en STM son defectuosas para colonizar hígado y bazo. Con esto, se concluye que MarT participa en la regulación negativa de STY1408, un gen involucrado en la virulencia de Salmonella enterica.