Examinando por Autor "Riedel S., Claudia"
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Ítem Análisis de la expresión de CXCR3 y su ligando CXCL10 en cáncer papilar de tiroides(Universidad Andrés Bello, 2010) Bohmwald Prieto, Karen; Riedel S., Claudia; González Díaz, Hernán; Facultad de Ciencias BiológicasEl cáncer de tiroides es la patología más común del sistema endocrino y el cáncer papilar de tiroides (CPT) es la manifestación más frecuente, dentro del cáncer tiroideo, con una incidencia entre el 75 al 80%. Si bien el CPT presenta un crecimiento lento y los pacientes que lo padecen tienen una alta sobrevida, éste presenta una alta frecuencia de metástasis a los nódulos linfáticos cervicales, característica que lo sitúa en un tipo de cáncer agresivo. Los factores moleculares involucrados en los procesos que conllevan a la metástasis del CPT a los nódulos linfáticos, se desconocen. Se ha propuesto que existen moléculas con capacidad quimioatractante, que estarían involucradas en conferir la capacidad proliferativa, migratoria e invasiva de las células tumorales hacia los nódulos linfáticos. Existen evidencias que sugieren a las quimioquinas y sus receptores, como aquellas señales específicas en el proceso de metástasis. Entre estas moléculas se encuentran el receptor CXCR3 y su quimioquina CXCL10. Se ha demostrado que CXCR3 y CXCL10 participarían en metástasis a los nódulos linfáticos en cáncer de colon y de mama. Estudios recientes muestran que tanto CXCR3 y CXCL10 se encuentran presentes en el infiltrado linfocitario en enfermedades inflamatorias de la tiroides. Con estos antecedentes planteo la siguiente hipótesis: "El receptor de quimioquinas CXCR3 y su quimioquina CXCL10, se encuentran sobreexpresados en el CPT. Éste aumento en la expresión se correlacionaría con factores clínicos de agresividad tumoral ". Para evaluar esta hipótesis se analizó, mediante PCR en tiempo real, el contenido de ARNrn de CXCR3 en muestras de CPT y tejido control correspondiente a la zona contralateral al tumor .Mediante inmunohistoquírnica se analizó el contenido y localización de las proteínas CXCR3 y CXCL10 en muestras control y con CPT. Se realizó un estudio de correlación entre los parámetros clínicos de agresividad y el contenido de CXCR3. Finalmente se evaluó, en una línea celular de CPT llamada TPC-1, el rol de CXCR3 y CXCL10 en la proliferación tumoral. Los resultados de esta tesis, apoyan parte de nuestra hipótesis, debido a que indican que el ARNm de CXCR3 aumenta 1 ,5 veces en CPT en comparación al tejido control. Este resultado se correlacionó con el aumento del 20% del contenido de CXCR3 y CXCL10 en muestras con CPT en comparación al tejido control. Los parámetros clínicos de agresividad no mostraron relación con respecto al contenido de CXCR3. CXCL10 no estimuló la proliferación de las células TPC-1 a las 24 hrs. de incubación en forma significativa. Basado en estos hallazgos, podemos concluir que en el CPT hay un aumento en la expresión de CXCR3 y su ligando CXCL10. La expresión aumentada de CXCL10 muestra una tendencia a conferir a las células de CPT una mayor capacidad de proliferación, proceso que es de gran importancia en la progresión tumoral.Ítem Compromiso molecular hacia el linaje neurogénico de células troncales mesenquimáticas humanas(Universidad Andrés Bello, 2006) Noches Gallardo, Verónica Andrea; Erices O., Alejandro; Riedel S., Claudia; Facultad de MedicinaLas células troncales mesenquimáticas (CTM) son parte de una población celular presente en el estroma de la médula ósea (CTM-MO) y en la sangre de cordón umbilical (CTM-SCU). Estas células poseen la capacidad de autorrenovación, generando células nuevas con características iguales a la inicial, y un potencial de diferenciación hacia linajes mesenquimáticos tales como hueso, cartílago, músculo y tejido adiposo. Así, las CTM tienen como función principal regular la homeostasis celular y los procesos de regeneración tisular de los linajes señalados. Adicionalmente, estructuran fisica y funcionalmente el estroma hematopoyético en la MO de un adulto. Observaciones en modelos animales sugieren que células presentes en la SCU y en la MO, entre ellas las CTM, pueden diferenciarse a células del linaje neurogénico. El objetivo del presente trabajo de tesis fue caracterizar la expresión de marcadores de linaje neurogénico en CTM humanas para evaluar el compromiso hacia este linaje. Así, es posible analizar el efecto de estímulos de diferenciación neurogénica a través de modificaciones en la expresión de dichos marcadores que puedan representar un progreso en esta vía. Para ello se obtuvieron CTM desde muestras de SCU y MO, las cuales se caracterizaron por inmunotipificación y capacidad de diferenciación. Estudios de expresión (RT-PCR, inmunodetección) y funcionalidad (EMSA), mostraron que las CTM expresan los marcadores tempranos de linaje neurogénico NeuroD, Hash-1 y nestina, pero no marcadores tardíos, como NeuN y GFAP. Utilizando distintos protocolos de inducción neurogénica se obtuvo cambios morfológicos y modificaciones en el perfil de marcadores tempranos, pero no se observó inducción de la expresión de marcadores tardíos. Estos resultados sugieren que las CTM-MO y las CTM-SCU, representarían una población multipotente, ya que además de expresar marcadores propios del linaje mesenquimático, expresan marcadores del linaje neurogénico. Además, nuestros resultados indican que la capacidad real de progresar hacia estadios diferenciados o maduros requiere señales de naturaleza más compleja que los utilizados.Ítem Detección del virus respiratorio sincicial (VRS) en cerebro de ratones infectados por este virus(Universidad Andrés Bello, 2009) Segovia Passalacqua, Gianella; Riedel S., Claudia; Facultad de Ciencias de la Salud; Escuela de Química y FarmaciaLa infección causada por el virus respiratorio sincicial (VRS) afecta principalmente las vías respiratorias bajas, pero además se ha observado que puede producir complicaciones neurológicas en lactantes (1-2%) tales como: apnea central, encefalopatía, encefalitis, ataxia, convulsiones y esotropía, aunque persiste la duda si estas complicaciones son causadas directa o indirectamente por la infección con VRS. Existen evidencias que apoyan efectos directos de VRS sobre el SNC tales como la detección de anticuerpos contra el virus y del ARN viral mediante RT-PCR. Nuevas investigaciones atribuyen a la proteína G viral mediante su motivo CX3C el eslabón clave para que VRS interactúe con células cerebrales en el receptor CX3CR 1. Estas evidencias tanto clínicas como moleculares llevan a analizar si VRS infecta células neuronales del SNC; en particular determinar la presencia y localización de VRS en cerebros de ratones infectados con VRS. En estos análisis se detectó VRS mediante la metodología de inmunofluorescencia y para ello se analizaron cortes cerebrales de ratones infectados con el virus y así estudiar la colocalización de VRS con células neuronales, células gliales y endotelio en cuatro regiones distintas del cerebro: corteza frontal, hipotálamo posterior y área dorsal, hipocampo y bulbo raquídeo. En los ratones infectados se vio la marca de VRS en cerebro, colocalizando mayor cantidad en neuronas con respecto a endotelio y en neuronas con respecto a astrocitos. De la marca total de VRS en el tipo celular neuronal, se encontró colocalización en el 5%. De la marca total de VRS en el tipo celular de astrocitos, se encontró colocalización en el 2%. De la marca total de VRS en el tipo celular endotelial, se encontró colocalización en el 1 %. De estos datos se concluye que VRS infecta células neuronales, gliales y endoteliales en todas las localizaciones vistas.Ítem Efecto de la hipotiroxinemia gestacional sobre la integridad de la barrera intestinal de la progenie(Universidad Andrés Bello, 2018) Gutiérrez González, Barbara Cecilia; Riedel S., Claudia; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaLa hipotiroxinemia (HTX) es una condición que se caracteriza por la disminución de los niveles plasmáticos de 3,5,3'5'-L-tetra-yodo-tironina (T4) mientras que los niveles plasmáticos de 3,4,3'-L-tri-yodo-tironina (T3) y de la hormona estimulante de la tiroides (TSH) permanecen normales. La HTX gestacional es dañina en el feto puesto que genera una impronta irreversible en el feto. Las hormonas tiroideas (HT) tienen un importante rol en el desarrollo intestinal y en la mantención de la homeostasis intestinal ya que estimulan la proliferación de células madres y células epiteliales del intestino. Además, las HT participan del recambio de las células epiteliales intestinales durante toda la vida. Debido a que las células epiteliales intestinales forman la barrera intestinal, la cual es la encargada de permitir y bloquear el paso de moléculas al organismo, es posible que la progenie gestada en HTX tenga alterada la permeabilidad intestinal. En base a estas evidencias se propone la siguiente hipótesis de trabajo: "La hipotiroxinemia gestacional aumenta la permeabilidad intestinal y la inflamación del intestino de la progenie" Para evaluar esta hipótesis propusimos los siguientes objetivos específicos: 1) Evaluar la permeabilidad intestinal de la progenie gestada en hipotiroxinemia; 2) Evaluar la histología intestinal y moléculas relacionadas con inflamación en el intestino de la progenie gestada en hipotiroxinemia. Para llevar a cabo estos objetivos se realizaron ensayos de permeabilidad in vivo utilizando FitCdextrano y HRP y ex vivo utilizando FSA y HRP. Los resultados obtenidos mostraron un aumento significativo de la permeabilidad paracelular a nivel del íleon de la progenie gestada en HTX. El análisis histológico de cortes de íleon teñidos con hematoxilina y eosina mostró mayor infiltrado celular, una mucosa más ensanchada y una submucosa más delgada en la progenie gestada HTX. Patrones similares a un cuadro de inflamación intestinal. Se observó aumento en la expresión del RNA mensajero para HO1 y disminución para el RNA mensajero de NQO 1. Mientras que no se observaron diferencias significativas para los RNA mensajeros ni la proteína de TNFa, INFy e IL-10. El análisis del contenido de proteínas que componen a las uniones estrechas como son ZO-1 y Ocludina mostró que el contenido de ZO-1 en el íleon está disminuido en la progenie gestada en HTX en comparación a la progenie control. Mientras el contenido de ocludina es similar en ambas progenies. Los resultados obtenidos en esta tesis apoyan la hipótesis de que la HTX gestacional imprime en la progenie mayor permeabilidad en la barrera intestinal del ileón. Además, los resultados del análisis histológico de esta tesis sugieren que el ileum de la progenie gestada en HTX presenta un estado inflamatorio basal. Este estado inflamatorio y la mayor permeabilidad de la barrera intestinal del ileum en la progenie gestada en HTX podría ser un factor que contribuyese al desarrollo de patologías como mal de Crohn, enfermedad celiaca o enfermedades del SNC asociadas a mayor permeabilidad intestinal como Parkinson y esquizofrenia.Ítem Evaluación de la plasticidad genética en Salmonella : estudio de la escisión y pérdida de una isla de patogenicidad inestable (ROD21) en Salmonella enterica serovar Enteritidis(Universidad Andrés Bello, 2010) Lizana Vera, Rodrigo Javier; Bueno R., Susan; Riedel S., Claudia; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaSalmonella enterica serovar Enteritidis (S Enteritidis) es una enterobacteria patógena capaz de causar cuadros de gastroenteritis en humanos y una enfermedad sistémica en ratones. Esta bacteria comparte un 90% de su genoma con otros serovares de Salmonella, mientras que el 10% restante es variable. Algunos de los genes que se encuentran en el 10% de variabilidad fueron posiblemente adquiridos por transferencia lateral de genes y constituyen islas de patogenicidad. Las islas de patogenicidad son un tipo de isla genómica caracterizada por contener agrupados genes que codifican proteínas involucradas en virulencia. Estas regiones se clasifican en islas de patogenicidad estables o inestables, dependiendo de su capacidad de escindirse del cromosoma bacteriano. Las regiones inestables, además de contener genes de virulencia, contienen genes relacionados con movilidad genética, como las integrasas y excisionasas. Además, poseen secuencias directas repetidas que se encuentran en los extremos de la isla de patogenicidad, las que son reconocidas por la proteína integrasa para catalizar su integración ylo escisión. Estas características permiten que la isla de patogenicidad se escinda del cromosoma bacteriano y eventualmente pueda perderse, lo que podría afectar la virulencia de la bacteria durante su ciclo infectivo. Basados en estos antecedentes, se propuso evaluar en esta tesis si el proceso de escisión y pérdida de islas de patogenicidad de Salmonella enterica varía durante el proceso de crecimiento bacteriano, para determinar si corresponde a un proceso dinámico que podría ser modulado durante el ciclo infectivo de la bacteria. Para evaluar este objetivo, se identificaron bioinformáticamente regiones genómicas en S Enteritidis que se encontraban ausentes en el genoma de S. Typhimurium y se evaluó si estas regiones poseían un gen que codifique para una integrasa. Además, se evaluó si estas regiones poseían genes involucrados en virulencia y si se encontraban delimitadas por secuencias directas repetidas. Se identificaron 3 regiones en el genoma de S Enteritidis que cumplían con los parámetros fijados. De estas 3 regiones, se prosiguió el .estudio con la región denominada ROD21, ya que poseía un gen que codifica para un factor de virulencia (tipA) que es requerido por S. Enteritidis para causar infección en ratones. Bioinformáticamente se determinó que ROD21 estaba en una región del cromosoma bacteriano donde hay 3 copias del gen que codifica para un tRNA para asparagina (asnT), uno de los cuales se encuentra en el borde izquierdo de la isla de patogenicidad. En el otro extremo se identificó una secuencia de 22 pb idéntica a la porción 3' de asnT, denominada secuencia directa repetida, lo que permitía deducir que esta región podría-escindirse del cromosoma bacteriano. Utilizando la técnica de PCR anidado se detectó que ROD21 se escinde del cromosoma bacteriano de 2 formas: la primera mediante la recombinación entre el gen que codifica para asnT y el directo repetido, mientras que la segunda forma corresponde a la recombinación entre dos genes que codifican para asnT, que poseen un 100% de identidad entre sí. Utilizando esta técnica también logramos detectar la secuencia que se forma en la isla de patogenicidad cuando se encuentra de forma circular, sin embargo la formación de este elemento episomal sólo pudo ser detectado para la primera forma de escisión. Utilizando una técnica de contraselección basada en la pérdida de los genes que codifican para la bomba de expulsión de tetraciclina, se determinó que la frecuencia con la que sucede el proceso de esción es de 2.42 x 10.8. Sin embargo, esta frecuencia corresponde sólo a la escisión de tipo 2 ya que no se logró obtener bacterias que perdieran ROD21 cuando la escisión ocurre entre las secuencias directas repetidas. Finalmente se diseñó un sistema basado en PCR cuantitativo en tiempo real para calcular la frecuencia de escisión en las diferentes etapas del crecimiento bacteriano. Se determinó que al inicio del crecimiento in vitro existe un aumento en la frecuencia de escisión de ROD21, la que va disminuyendo a medida que aumenta la densidad bacteriana en el medio de cultivo. Los resultados de este trabajo permiten concluir que S. Enteritidis posee islas de patogenicidad inestables en su genoma, cuya frecuencia de escisión varía dependiendo del estado de crecimiento de la bacteria. Esta tesis permitirá sentar las bases para el estudio de islas de patogenicidad inestables en modelos de infección.Ítem Impacto de la deficiencia de hormonas tiroideas maternas en la gestación, sobre el proceso de astrogliosis reactiva frente a inflamación en la progenie(Universidad Andrés Bello, 2013) González Figueroa, Pablo Andrés; Riedel S., Claudia; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaLa deficiencia de hormonas tiroideas maternas en la gestación, tanto el hipotiroidismo como la hipotiroxinemia, daña irreversiblemente el sistema nervioso central del feto (SNC). Especificamente se ha observado daño en la maduración y diferenciación tanto de las neuronas como de las células gliales. Entre las células gliales se encuentran los astrocitos, células que cumplen diversas funciones en el SNC. Una de las funciones de los astrocitos es la astrogliosis reactiva frente a una respuesta inflamatoria. La astrogliosis se caracteriza por aumento del tamaño del astrocito, del número de sus proyecciones y de su proliferación. Las evidencias indican que la astrogliosis es un proceso de protección frente al daño inflamatorio. La astrogliosis reactiva sea descrito en enfermedades como la esclerosis múltiple (EM). La EM es una enfermedad autoinmune al SNC cuya etiología es desconocida, multifactorial y con una incidencia alta a nivel mundial. La EM se caracteriza por presentar desmielinización y degeneración neuronal, consecuentemente la pérdida de la actividad motora y cognitiva del paciente. La EM se estudia en gran medida en un modelo experimental de animales llamado encefalomielitis autoinmune experimental (EAE). Evidencias de nuestro laboratorio han mostrado que animales gestados bajo la deficiencia de hormonas tiroideas sufren de EAE más severo que los animales gestados en condiciones eutiroideas. Basados en los antecedentes descritos anteriormente, sobre el rol de las hormonas tiroideas en la diferenciación de los astrocitos proponemos las siguiente hipótesis: "La astrogliosis reactiva generada en procesos inflamatorios, se encuentra disminuida en astrocitos provenientes de la progenie gestada con déficit de hormonas tiroideas tanto como el hipotiroidismo o la hipotiroxinemia". Con el objetivo de responder a esta hipótesis evaluamos la astrogliosis en animales que sufren EAE y que se gestaron en madres con hipotiroidismo. Además estudiamos el rol de factor tumoral de necrosis a (TNFa), molécula clave en el desarrollo de EAE, sobre la astrogliosis reactiva en un modelo in vitro de astrocitos provenientes de ratas gestadas en hipotiroxinemia. Los resultados obtenidos en esta tesis, muestran que el hipotiroidismo gestacional produce astrogliosis reactiva sólo en regiones específicas del SNC en que padecen EAE., Los resultados del estudio in vitro mostraron una mayor expresión de ¡NOS principal molécula inflamatoria involucrada en el daño durante la EM. En conclusión, nuestros resultados indican que la deficiencia de hormonas tiroideas durante la gestación genera una impronta en los astrocitos, haciéndolos más inflamatorios pero disminuyendo su capacidad de astrogliosis reactiva.Ítem Rol de interleuquina-4 en el aprendizaje y memoria de la progenie gestada en hipotiroidismo(Universidad Andrés Bello, 2017) Marambio Contreras, Yamil Gipsy; Riedel S., Claudia; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaEl hipotiroidismo se caracteriza por la disminución de los niveles plasmáticos de triyodotironina (T3) y tiroxina (T4) y un aumento de los niveles de la hormona estimulante de la tiroides (TSH). El hipotiroidismo gestacional causa deterioro cognitivo irreversible en la progenie mediante mecanismos aún desconocidos. Se ha descrito que IL-4 es necesaria para el aprendizaje y memoria. IL-4 es una citoquina secretada por el sistema inmune (SI). Basado en estas evidencias y en que la progenie gestada en hipotiroidismo presenta disminuida su capacidad cognitiva proponemos la siguiente hipótesis: "La administración de IL-4 mejora la capacidad de aprendizaje y m em oria de la progenie gestada en hipotiroidismo" Con el objetivo de evaluar la hipótesis se propusieron los siguientes objetivos: (1) Analizar los niveles de IL-4 en suero y cerebro de ratones gestados en hipotiroidismo que serán y no serán sometidos a test de aprendizaje y memoria y (2) evaluar in vivo el efecto de la administración de IL-4 en el aprendizaje y memoria de ratones gestados en hipotiroidismo. Utilizando un modelo murino, se evaluó la capacidad cognitiva de la progenie gestada en hipotiroidismo mediante los test de "Barnes Maze" (BM) y "Novel Object Recognition" (NOR). Se observó una disminución significativa de la capacidad cognitiva y en los niveles séricos de IL-4 en los ratones que se gestaron en hipotiroidismo. Luego se administró IL-4 a los ratones durante la realización de los test de BM y NOR, observándose una mejora significativa de la capacidad de aprendizaje espacial en la progenie gestada en hipotiroidismo. Los resultados de esta tesis sugieren que la administración exógena de IL-4 tendría efectos positivos sobre la capacidad cognitiva de la progenie gestada en hipotiroidismo.